外源性胆固醇对肝细胞中甘油三酯、总胆固醇含量及相关基因的表达调控研究.pdfVIP

摘 要。 胆固醇代谢与肝脂肪变性密切相关，目前很少有关于外源性胆固醇对细胞水平的 肝内胆固醇及脂肪酸代谢影响及其机制的报道。本实验为了研究胆固醇在肝细胞脂肪 变性过程中的作用，以15日龄四川白鹅和朗德鹅原代肝细胞为材料，检测了外源性胆 固醇对肝细胞内甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)含量的影响，并采用实时荧光定量 表达的变化情况，获得以下主要结果： (1)采用Selgon二步灌流法能够很好的分离纯化鹅肝细胞，平均每只鹅能提取 鹅肝细胞6×107细胞，细胞活率达到90％以上。 (2)1030la 其中2Dp g／ml的胆固醇促进作用最为明显；随胆固醇培养时间的增加，细胞中TG 含量显著高于四川白鹅(P0．05)。 (3)1030la 1．t 其中20g／ml的胆固醇促进作用最为明显；同时随着培养时间的延长，SREBP．1的 表达量呈现上升趋势，其中48h表达量达到最高，与培养0、12、24h的表达量相比， 比较，朗德鹅SREBP．1mRNA表达量显著高于四川白鹅(P0．05)。 (4)10--,30lag／ml胆固醇对生脂关键基因FAS的表达有促进作用，显著增加了 FAS 1．t mKNA的表达水平(Po．05)，其中20 g／ml的胆固醇促进效果最为显著。随着 培养时间的延长，FAS的表达量呈现上升趋势，48h表达量达到最高，与培养0、12、 品种鹅各处理组间比较，朗德鹅FASmRNA表达量显著高于四川白鹅(P0．05)。 (5)不同浓度胆固醇处理后，两品种鹅肝细胞中TC含量变化均不显著(PO．05)； 随胆固醇处理时间的增加，细胞中TC含量开始呈上升趋势，24h达到最高，与对照 异不显著(PO．05)而两品种鹅各处理组之间相比，朗德鹅肝细胞中TC含量要显著 高于四川白鹅(P0．05)。 (6)10-30la mRNA的 g／ml胆固醇显著降低了两个品种鹅肝细胞中的SREBP-2 la 水平(PO．05)，其中20 g／ml的胆固醇降低效果最为明显；随培养时间的延长， 鹅各处理组间比较，SREBP．2mRNA表达量间没有显著差异(PO．05)。 (7)10-30la 的表达量呈下降趋势，其中培养48h的表达量最低。与培养0、12、24h的表达量相 组间HMGR mRNA表达量没有显著差异(P0．05)。 (8)两品种鹅肝细胞中的TG含量与胆固醇浓度存在一定正相关，但相关不显 胆固醇浓度存在一定正相关，但相关不显著(P0．05)，而与胆固醇处理时间存在显著 (9)两品种鹅肝细胞中TC含量与胆固醇浓度及处理时间均不存在显著性相关 关系； 表达量间存在极显著正相关(PO．01)。 ． 关键词：胆固醇；HMGR；FAS；熨龌胆j：SREBP-2；实时荧光定量PCR of TCand EffectofcholesterolOilaccumulation TG expression of in correlative genesgooseprimaryhepatocytes ZhangZhong—xian and (AnimalGenetics，BreedingReproduction) Directed Ji—wen byProf．Wang