奶牛腐蹄病病原的分离鉴定与生物特性研究.pdfVIP

’ 摘要 腐蹄病(Footrot)是引起牛，羊、鹿等反刍动物常见且发病率较高的一种危害严重的传 染病，在反刍动物的蹄病中是危害性很大的一类疾病，主要病原菌为坏死梭杆菌 (Fusobacterium 胞毒素、内毒素、溶血素、血凝素和各种蛋白酶起致病作用；节瘤拟杆菌主要通过细菌纤毛 和蛋白酶起致病作用，其他杂菌在致病中起辅助作用，所以腐蹄病的主要判定依据是检测到 癀料中是否有节瘤拟杆菌和坏死梭杆菌的存在。 本实验通过对黑龙江省部分农场采集的1l份奶牛腐蹄病病料进行病原菌分离培养和鉴 定，分别从绿色农场奶牛病蹄组织4头份、九三农场奶牛蹄部浓汁3头份病料中分离出致病 性坏死梭杆菌，没有观察和分离到节瘤拟杆菌。同时从病料中分离出链球菌、大肠埃希氏杆 菌，沙门氏菌、粪弯曲杆菌、化脓棒状杆菌、梭菌，酵母菌和不同的球菌等，其中化脓棒状 杆菌和梭菌为腐蹄病辅助因子；链球菌、大肠埃希氏杆菌，不同的球菌等为环境常在菌。 通过对腐蹄病病料病原菌的分离培养筛选出适合病原菌分离用的马冻融血、厌氧血琼脂 固体培养基；适合病原菌增殖的硫乙醇酸盐和坏死梭杆菌液体培养基，并找到了病原菌最适 宜的培养条件干燥器培养方法．同时经生化鉴定和PCRt佥测试验证实，所采集病料中主要病 原菌为坏死梭杆菌，无节瘤拟杆菌。 对分离的坏死梭杆菌进行药敏试验结果表明，青霉素类、头孢菌素类、克林霉索对坏死 梭杆菌抑制效果最好；红霉素，中药组方I对坏死梭杆菌中度敏感；卡那霉素、庆大霉索、万 古霉素等对坏死梭杆菌耐药。在对坏死梭杆菌进行保存条件实验，结果表明坏死梭杆菌在4℃ 条件下2周内存活完好：在-20℃条件下3个月内存活完好；在．70℃条件下可存活一年以上。在 对坏死梭杆菌生长规律测定试验中，表明坏死梭杆菌生长在20～38h之间为对数期，34～38h 之后进入稳定期。用分离的坏死梭杆菌进行实验动物致病性试验，可引起实验鼠和兔的发病 与死亡，同时坏死梭杆菌在再培养过程中呈8型溶血，表明分离纯化的坏死梭杆菌有致病性。 综合以上实验结果分析表明，黑龙江省部分农场奶牛腐蹄病的主要病原菌为坏死梭杆 菌，同时伴有大量其他杂菌，而无节瘤拟杆菌。患腐蹄病的动物死亡率虽然低，可它造成的 经济损失大．本试验通过对奶牛腐蹄病病原菌的分离鉴定与生物特性研究为科学地指导临床 用药，治疗腐蹄病提供了科学依据，为深入开展腐蹄病病原菌的研究提供必要的实验基础。 关键词腐蹄病；节瘤拟杆菌：坏死梭杆菌；PCR；分离和鉴定：药敏试验 The ofIsolationandIdentificationofcowFootrot Study Bacteriumand Characteristicsto Pathogenic Biological the Pathogens Abstract deer animaland Footrotwhieharises the andother cow,Ⅱ∞sheep,the commonly colmtm--hay akindofbermfulserious disease．Inthe has thediseaseincidenceis infectious higher coon懈-bey animal’shoofdisease．itc部∞嚣seriousharm．BacteroidesPlodosu$andFusobacteriwn of of