恶性疟原虫abtrakt同源基因的克隆及食蟹猴疟原虫eif-4a同源蛋白的cdna克隆、表达和atp酶活性研究.pdfVIP

中文摘要 代谢过程，存儿乎所仃生物的细胞化长发育过程中扮演着众多才i可或缺的角色。疟 疾目前仍然是世界上讪：多地方的一个主要的健康问题：控制疟疾的一个可行的办法 就是研制出通过阻断疟原虫生长有关的关键酶来抑制其qi长的药物，比如通过阻断 DNA／RNA解旋酪等。按照此思路，我们进行了有天疟原虫DNA／RNA解旋酶的研 abstrakt 究。本研究主要丌展了两个方面的工作：1，克隆了Plasmodium砌ciparum 全长基因，分析了该蛋白的结构：并且依据不同DEAD—box蛋白的结构特征进行了 并对其ATPase活性进行了检测。 在本实验中，通过PCR和探针杂交相结合的筛选方法，筛选恶性疟原虫 rPlasmodium 整序列。通过搜索已经完成测序的恶性疟原虫基因组数据库，推测删F序列定位在 804 第5条连锁群上。FftlF全长2bp，包含一个1161bp的完整阅读框，编码一个由386 个氨基酸组成的蛋白。对FHlF蛋白序列用BlastP进行搜索和分析以及用DNAStar与 行详细的序列分析以及用Mega对这些序列进行系统发育研究的结果都显示： 不同的结构特征。本文对不同的DEAD—box蛋白的结构特征进行了总结并试图给出不 同亚群分类上的结构标准，对Abstrakt蛋白在本应高度保守的位点上异常于其它 DEAD-box蛋白的氨基酸残基的取代也进行了相关的初步分析。 采用同样的基因克隆方法筛选食蟹猴疟原虫(P]Jsmod／umcyno师o／gi)的cDNA 197 包含一个1 bp的完整阅读框，推测编码一个由398个氨罐酸组成的蛋白。对 CHlF的蛋自序列用BlastP进行搜索和分析，提示它应该是DEAD—box家族的一个 致性和更多序列上的相似结构域。 将包含完整阅读框的片段砸克隆到表达载体 pET一28a(十)，在大肠杆菌DH5o中表达，产生的融合蛋白大小在45kD左右。对该融 合蛋白进行纯化、重新折叠和初步鉴定。ATP酶活性检测显示，浚融合蛋白只有很低 的AIP酶活性，而且它的ATP酶活性似乎小依赖于核酸底物。对这。检测结果给出3种 华中农业^掌博士掌位论文 。I『能的原W。这 检删结果与根掂序列分析得到的手f}{论一L|【1I?蛋白¨r能址一个 。川。4^jf4；矛盾。 关键词恶性疟原虫 食蟹猴疟原虫Abstrakt真核翻译起始因了一4ARNA解旋 嗨ATP酶DEAD—box序列分析 ABSTRACT A1 RNAhelicaseoftheDEAD—box inalmost The P‘dependent family．1nvolved celluar ofRNA essentialroles cell every process many metabolism．play during and inalmostall stillremainsa health developmentgrowth organisms．Malariamajor in oftheworld．Oneofthe tocontrolmalariacouldbe problemmanyparts possibleways todiscoverinhibitors fortheessential ofmalaria like specific enzymes parasite DNA／RNAhelicases．Inordertofollowthis have