抗体免疫选择压用下新城疫病毒hn基因和f基因的变异.pdfVIP

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2016-02-22 发布于贵州
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抗体免疫选择压用下新城疫病毒hn基因和f基因的变异.pdf

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抗体免疫选择压用下新城疫病毒hn基因和f基因的变异

／㈣Y1 7㈣863㈣47纺目录符号说明………………………………………………………………………一1 中文摘要…………………………………………………………………………2 英文摘要………………………………………………………………………-4 1．1NDV的一般生物学特性…………………………………………………”6 。 1．1．1NDV的生物学活性……………………………………………………·6 L1．2 NDV的培养特性………………………………………………………·7 1．1．3 NDV的致病特性…………………………………………………………7 1．2NDV的分子病原特性………………………………………………………8 1．2．1 NDV的基因结构…………………………………………………………8 1．2．2 NDV的结构蛋白………………………………………………………“9 1．3NDV致病的分子基础…………………………………………………”15 1．4 NDV的分子流行病学………………………………………………………18 1．4．1 ND四次大流行与基因型分类…………………………………………·18 1．4．2国际NDV流行现状与基因型分析……………………………………“20 1．4．3国内ND流行趋势与基因分型研究现状……………………………”22 1．5免疫选择压对病毒演化的影响……………………………………………24 1．6本研究的目的及意义……………………………………………………·26 2材料与方法…………………………………………………………………28 2．1材料………………………………………………………………………………………………28 2．1．2SPF鸡和鸡胚来源…………”_…………………………………………28’ 2．1．3主要试剂和仪器以及相关培养基和溶液的配置………………………28 2．1．4引物……………………………………………………………………………………………29 2．2方法……………………………………………………………………………………………“29 2．2．1鸡胚成纤维细胞的制备……………………………………………………“29 2．2．2病毒的处理………………………………………………………………29 2．2．3抗NDV单因子血清的制备及其效价的测定……………………………·30 2．2．4病毒的传代……………………………………………………………………30 1 2．2．5病毒RNA的提取……………………………………………………”3 1 2．2．6 cDNA……………………………………………………………3 RT．PCR扩增NDV 1 2．2．7PCR反应…………………………………………………………………………………”3 2．2．8凝胶回收DNA…………………………………………………………32 2．2．9 PCR产物与T载体的连接……………………………………………33 2．2．10 PCR产物的克隆………………………………………………………33 2．2．11序列的测定……………………………………………………………”35 NDV 2．2．12 HN和F基因序列比较分析………………………………．．．…·35 2．2．13HI交叉抑制试验……………………………………………．．．………35 3结果与分析…………………………………………………………………37 3．