猪ifn-γ基的表达及抗体制备和鸡ii链功能的研究.pdfVIP

摘要一 I和、MHC 增强细胞毒性T细胞功能、促进B细胞分化、MHC II类分子的表达以及 活化巨噬细胞。为研究猪丫干扰素(poIFNq,)的生物学活性及其在机体免疫应答中 的作用机理，本研究进行了该基因的克隆、表达和多克隆抗体的制备。 首先，应用RT-PCR方法通过一对自行设计的引物从猪脾脏淋巴细胞中扩增了猪 丫干扰素基因片段，经单酶切鉴定，与GenBank中登录的猪IFN一丫基因序列含有相同 筛选出阳性重组克隆后进行序列测定，测序结果表明，克隆获得的蜊吖基因全长为 完全一致。 1，经IPTG 诱导，得到高效表达。所表达的融合蛋白主要是以不溶性的包涵体形式存在，分子量 约43．0kD和35．0kD，与理论推算值相符。通过优化原核表达条件，确定了原核表达 最后，利用上述纯化的GST-IFN吖融合蛋白作为抗原免疫小鼠制备鼠抗猪IFN吖 多克隆抗体。在对目标蛋白进行复性和亲和层析纯化之后，用其免疫小鼠，制备了针 对该蛋白的鼠