环丙沙星单克隆体的制备及elisa检测方法的建立.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 速、生物利用度高、体内分布广泛、耐药性产生慢且与其他抗生素无交叉耐药反 应，广谱而高效，被广泛用于兽医临床和畜牧生产，用于治疗动物疾病和作为饲 料添加剂使用。但环丙沙星作为一种人畜共用药，药物残留通过食物链对人体危 害极大，不利于将该类药物应用于人类疾病的治疗。美国、欧盟、中国等均对动 物源性食品中环丙沙星残留限量做了禁用或限用的规定。为了监测畜产品中环丙 沙星的残留，建立一种快速检测环丙沙星残留的方法具有十分重要的现实意义。 ELISA凭借特异性强、灵敏度高、快速的优点，普遍应用于药物的残留检测。 本研究运用化学合成方法制备CIP完全抗原，采用单克隆抗体技术制备了灵敏度 高、特异性强、效价高的抗体，并建立CIP的CiELISA测定方法。鸡肝脏加标回 收试验证明，建立的检测CIP残留的C圯LISA是稳定、可靠的。 1．CIP完全抗原的合成与鉴定 采用N_羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法和混合酸酐法将CIP与载体蛋白牛 2．CIP单抗的制备 CIP．OVA为检测原。五免后阳性血清效价为1：6，000左右。利用杂交瘤技术获得l 株可持续分泌针对药物CIP抗体的杂交瘤细胞株6E4。采用体内诱生法，将细胞