猪带绦虫六钩蚴sol18重组基因工程疫苗的研制.pdfVIP

摘要 囊虫病(Cysticercosis)是由猪带绦虫(7aenia solium)的幼虫一猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosaD感染猪或人而引起的人畜共患寄生虫病。是联合国卫生组织列为需要根除的穴火疾 病之一。目前，研制有效的猪囊虫疫苗来控制和消除流行于世界各地的囊虫病是世界各国普遍 关注的焦点。 本研究从孵化并激活的猪带绦虫六钩蚴中提取总RNA，利用RT—PCR技术在国内首次克隆了猪 带绦虫六钩蚴疫苗侯选基因TSOLl8基因。选用近年来发展最快和最具潜能的真核表达系统一毕 度筛选法．获得多拷贝重组菌株。对重组菌株用甲醇进行诱导表达，SDS—PAGE和Western—blot 分析结果表明，诱导表达的培养上清中表达出大小为12ku和16ku具有反应活性的重组蛋白。用 糖苷内切酶H(Endo-H)对TSOLl8蛋白分析后表明，目的蛋白进行了适度的糖基化修饰。通 过对发酵条件如pH、温度和溶氧水平等的调整，重组毕赤酵母在乩发酵罐高细胞密度发酵中表 达量达2．549／L，用薄层扫描分析，目的蛋白约占培养上清蛋白总量的80％以上。 在猪带绦虫疫苗研究中，首次应用具有天然蛋白特性的真核表达产物进行动