猪氨基肽酶在mck细胞中的表达与鉴定.pdfVIP

摘要 摘要 毒的猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、人冠状病毒229E、猫冠状病毒等都以相应的 氨基肽酶作为其细胞感染的受体。 I和Hinal／I酶切位点的引物， 本研究以pMDl8．T-pAPN为模版，设计了一对带有BamH I和肼，7皿位点之间，构建 将pAPN基因克隆出来并插入到真核表达载体pEFP-C1的BamH 了重组质粒pEGFP．C1．pAPN。经公司测序，所插入的pAPN基因连接位点正确，并利用三 维蛋白空间结构预测软件预测分析，pAPN基因可以和GFP基因融合表达，所表达出的蛋白 的空间结构相互没有影响，与自然存在的蛋白结构相符。选用PEDV非许可性细胞犬。肾细胞 canine (Madin．Darbykidney,MDc目，通过脂质体介导的方法将重组质粒转染至MDCK细胞 中，利用载体pEFP-C1含有中新霉素磷酸转移酶抗性基因的特性，向细胞培养液中添加新霉 素抗性药物G418筛选，同时运用荧光检测手段，实时检测GFP蛋白的表达情况。经过筛选， 将mRNA进行反转录，针