全新HIV感染的实验诊断.ppt

HIV感染的实验诊断 白立石 北京市疾病预防控制中心 艾滋病确认中心 2008年5月 感染HIV后的血清学变化 HIV-1早期感染病毒标志物的动态观察 二、HIV酶联筛查检测方法和试剂 ※感染急性期 ， 窗口期 ※检测试剂以ELISA为主，还有PA，斑点免疫胶体金和免疫层析。 ※ELISA试剂为HIV1/2型，包括M和O组，N组不包括但很少。 ※ 三四五代酶联试剂的差异和使用策略： 三代成熟质量稳定，窗口期20d;四代提前4－9d，质量不稳定，用于血站急性感染的检测。 ※ 筛查试验和确认试验的差异： 酶联试验敏感性高于确认试验，四代试剂敏感性更高，确认阴性的不一定是真阴性。 （一）HIV抗体ELISA检测试剂（血液） 第三代：双抗原夹心法，可检测所有类型抗体，由于能检出IgM抗体，缩短了窗口期，有报道说较第二代产品平均可提前5天作出诊断。 第四代：双抗原（抗体）夹心法，将HIV P24抗体和HIV抗原同时包被，再加入待检血清，最后加入酶标记的HIV抗原和HIV P24单克隆抗体，同时检测血清中的HIV P24抗原和HIV抗体。 第五代：HIV抗体和P24抗原实现分别检测，真正实现早期诊断。 各种HIV检测方法平均窗口期 方法 平均天数 第2代EIA 45 第3代EIA 22 P24抗原 16 HIV RNA 11 ⑶ HIV抗体测定的预测值：试剂的敏感性和特异性可衡量优劣，但不能完全决定一个测定结果正确与否的可能性大小，与预测值关系更大。 預測值除与试剂好坏有关外，还取决于测定对象本身患病率的高低。由表1可以看出：在用ELISA法对高危人群检测时，其阳性预测值为99.98%，而在非高危人群中，阳性预测值仅为18.94%（即查出阳性结果是真阳性的机率只有18.94%），反之阴性结果的机率为99.997%。 ? 表1 ELISA法HIV1抗体测定的预示值 表2 HIV感染机率与ELISA反应强度的关系 注： 1、数字表示相应强度反应的血清中含有HIV抗体的概率 2、低度为S/CO1,中度为1S/CO6, 高度为S/CO6。 三、确认试验 WB为主，还有：线性免疫试验（LIA）,放射免疫沉淀试验（RIPA）和免疫荧光试验（IFA）。 WB存有培养病毒的宿主细胞成分，容易出现非特异性反应造成不确定结果，LIA使用重组蛋白（多肽），非特异性大大减少，试剂盒有INNO-LIA,Pepti-Lav等。IFA很少使用。 （一）、HIV抗体强度与抗体带型的关系 （二）、HIV病毒载量与抗体带型的关系 （三）、造成WB假阳性或不确定的原因 1.实验室操作中，阴性样本被污染或洗涤不彻底。 2.HIV感染急性期，窗口期附近，仅显示gp160或120，或P24，P31，P55带；此时ELISA往往已显示阳性反应 3.晚期AIDS病人，部分抗体如P24，P31丢失 4.其他病毒感染的交叉反应，如风疹，麻疹，腮腺炎等 5.自身免疫病，高丙种球蛋白血症（全身性红斑狼疮） 6.肾衰竭和血透析 7.遗传性胰腺囊肿 8.多次怀孕或输血 9. 肝病 10.乙肝、狂犬等疫苗注射，使用胸腺肽。 11.线粒体核酸和T细胞白细胞抗原引起的抗体 （四）WB不确定结果的有关数据 在无高危行为的献血和孕妇人群中， WB不确定率10-15%，甚至高达32％. Gag蛋白抗体条带最常见。 ELISA筛查阳性结果中，WB不确定占4-20%,俄罗斯报告占12.7%。 我国，125份确认为HIV-1抗体阳性;条带出现百分率为：gp160、p24为100%, gp120、gp41、p66、p51和p31在96%以上, p17、p55分别为86.4%和85.6%. 上海，36例WB试验 gp120和 p24双阳性者的跟踪随访和核酸辅助诊断发现，至少24例可判定为HIV-1感染。5例样本的核酸测定结果与血清学随访检测结果的符合率达到100%。25例随访到的对象中，18例样本平均17 天后条带有明显进展，可以判定为HIV抗体阳转 。 （五）假阴性结果 指EIA+WB的假阴性 原因 急性感染后的抗体迟反应 不同HIV毒株型 发病晚期抗体消失 窗口期：几周到6个月，与当地HIV流行率有关 HIV亚型，M/N/O组间差异 （六）、确认试验不确定标本的常规处理 按照《全国艾滋病检测技术规范（2004年版）》的要求，只能作“3个月后复检”的处理，三个月后复检1次，连续2次，共6个月。 其转归有两种可能：仍呈现不确定或阴性，则诊断为HIV抗体阴性；带型发生进展，符合HIV抗体阳性判断标准，则诊断为HIV抗体阳性。后者是真正的窗口期感染者（一般为2-