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HIV感染的实验诊断 白立石 北京市疾病预防控制中心 艾滋病确认中心 2008年5月 感染HIV后的血清学变化 HIV-1早期感染病毒标志物的动态观察 二、HIV酶联筛查检测方法和试剂 ※感染急性期 , 窗口期 ※检测试剂以ELISA为主,还有PA,斑点免疫胶体金和免疫层析。 ※ELISA试剂为HIV1/2型,包括M和O组,N组不包括但很少。 ※ 三四五代酶联试剂的差异和使用策略: 三代成熟质量稳定,窗口期20d;四代提前4-9d,质量不稳定,用于血站急性感染的检测。 ※ 筛查试验和确认试验的差异: 酶联试验敏感性高于确认试验,四代试剂敏感性更高,确认阴性的不一定是真阴性。 (一)HIV抗体ELISA检测试剂(血液) 第三代:双抗原夹心法,可检测所有类型抗体,由于能检出IgM抗体,缩短了窗口期,有报道说较第二代产品平均可提前5天作出诊断。 第四代:双抗原(抗体)夹心法,将HIV P24抗体和HIV抗原同时包被,再加入待检血清,最后加入酶标记的HIV抗原和HIV P24单克隆抗体,同时检测血清中的HIV P24抗原和HIV抗体。 第五代:HIV抗体和P24抗原实现分别检测,真正实现早期诊断。 各种HIV检测方法平均窗口期 方法 平均天数 第2代EIA 45 第3代EIA 22 P24抗原 16 HIV RNA 11 ⑶ HIV抗体测定的预测值:试剂的敏感性和特异性可衡量优劣,但不能完全决定一个测定结果正确与否的可能性大小,与预测值关系更大。 預測值除与试剂好坏有关外,还取决于测定对象本身患病率的高低。由表1可以看出:在用ELISA法对高危人群检测时,其阳性预测值为99.98%,而在非高危人群中,阳性预测值仅为18.94%(即查出阳性结果是真阳性的机率只有18.94%),反之阴性结果的机率为99.997%。 ? 表1 ELISA法HIV1抗体测定的预示值 表2 HIV感染机率与ELISA反应强度的关系 注: 1、数字表示相应强度反应的血清中含有HIV抗体的概率 2、低度为S/CO1,中度为1S/CO6, 高度为S/CO6。 三、确认试验 WB为主,还有:线性免疫试验(LIA),放射免疫沉淀试验(RIPA)和免疫荧光试验(IFA)。 WB存有培养病毒的宿主细胞成分,容易出现非特异性反应造成不确定结果,LIA使用重组蛋白(多肽),非特异性大大减少,试剂盒有INNO-LIA,Pepti-Lav等。IFA很少使用。 (一)、HIV抗体强度与抗体带型的关系 (二)、HIV病毒载量与抗体带型的关系 (三)、造成WB假阳性或不确定的原因 1.实验室操作中,阴性样本被污染或洗涤不彻底。 2.HIV感染急性期,窗口期附近,仅显示gp160或120,或P24,P31,P55带;此时ELISA往往已显示阳性反应 3.晚期AIDS病人,部分抗体如P24,P31丢失 4.其他病毒感染的交叉反应,如风疹,麻疹,腮腺炎等 5.自身免疫病,高丙种球蛋白血症(全身性红斑狼疮) 6.肾衰竭和血透析 7.遗传性胰腺囊肿 8.多次怀孕或输血 9. 肝病 10.乙肝、狂犬等疫苗注射,使用胸腺肽。 11.线粒体核酸和T细胞白细胞抗原引起的抗体 (四)WB不确定结果的有关数据 在无高危行为的献血和孕妇人群中, WB不确定率10-15%,甚至高达32%. Gag蛋白抗体条带最常见。 ELISA筛查阳性结果中,WB不确定占4-20%,俄罗斯报告占12.7%。 我国,125份确认为HIV-1抗体阳性;条带出现百分率为:gp160、p24为100%, gp120、gp41、p66、p51和p31在96%以上, p17、p55分别为86.4%和85.6%. 上海,36例WB试验 gp120和 p24双阳性者的跟踪随访和核酸辅助诊断发现,至少24例可判定为HIV-1感染。5例样本的核酸测定结果与血清学随访检测结果的符合率达到100%。25例随访到的对象中,18例样本平均17 天后条带有明显进展,可以判定为HIV抗体阳转 。 (五)假阴性结果 指EIA+WB的假阴性 原因 急性感染后的抗体迟反应 不同HIV毒株型 发病晚期抗体消失 窗口期:几周到6个月,与当地HIV流行率有关 HIV亚型,M/N/O组间差异 (六)、确认试验不确定标本的常规处理 按照《全国艾滋病检测技术规范(2004年版)》的要求,只能作“3个月后复检”的处理,三个月后复检1次,连续2次,共6个月。 其转归有两种可能:仍呈现不确定或阴性,则诊断为HIV抗体阴性;带型发生进展,符合HIV抗体阳性判断标准,则诊断为HIV抗体阳性。后者是真正的窗口期感染者(一般为2-
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