鲁西黄牛胚胎骨肌卫星细胞分离培养及生物学特性研究.pdfVIP

摘 要 骨骼肌卫星细胞 （satellite cells，SCs）最早由Mauro 在蛙胫前肌中发现，具 有较强的自我更新、增殖和多向分化潜能，在体外培养条件下能跨胚层分化为多种细 胞类型。鲁西黄牛是世界上著名的肉用牛，已列入国家级畜禽遗传资源重点保护品种 名录。本研究旨在建立鲁西黄牛胚胎骨骼肌卫星细胞体外扩增培养体系，并探索其低、 中、高代次细胞增殖、分化等生物学特性，结论如下： （1）本研究选取鲁西黄牛四肢骨骼肌，采用机械分离法、联合酶消化法及差速贴 壁法，成功分离获得牛 SCs，优化了牛 SCs 体外扩增的最佳培养体系，并将牛 SCs 成 功传至 23 代，冻存后牛 SCs 仍具有较高的细胞活率。 （2）免疫细胞化学染色检测牛 SCs 标志物表达，结果显示，P4、P9、P20 代牛 SCs 均为 Desmin、MyoD 阳性表达；RT-PCR 检测牛 SCs 标志物表达，结果显示 P4、P9、P20 代牛 SCs 均为 Desmin、Pax7、c-Met、Myf5 阳性表达，且灰度分析结果显示，不同代 次 SCs 同一标志物表达量差异不显著，符合 SCs 标志物表达情况。 （3）P4、P9、P20 代牛 SCs 生长曲线均呈标准“S”型，分