黄瓜芽黄突变相关基因ClpP克隆及其功能分析.pdfVIP

摘 要 目的：（1）以正常黄瓜(Cucumis sativus L.)（新泰密刺）和芽黄突变体黄瓜（新泰密刺）为研究 对象，筛选正常与芽黄突变体黄瓜中的ClpP基因，分析其核酸序列并预测相关蛋白的结构和功能。 为后期研究芽黄相关基因ClpP的作用机制提供目标序列和研究基础。（2）构建芽黄相关基因ClpP 的植物表达载体，并进行该基因对烟草的遗传转化，通过生理性状分析该基因功能。 方法：（1）分别提取正常黄瓜和芽黄突变体黄瓜不同生长时期叶片的总RNA，反转录合成cDNA， 采用特异性引物PCR扩增得到芽黄相关基因ClpP的cDNA序列核心序列，连接到pGEM-T载体后测 序，测序结果经Blaxtn和GenBank公共数据库进行比对分析。（2）含目的片段的pGEM-T载体和 农杆菌EhA105经双酶切后分别获得目的条带和表达载体，用连接酶连接获得重组子后经电击转化 转入农杆菌并用该农杆菌侵染烟草愈伤组织。愈伤组织诱导分化发芽后，观察其生理性状分析其 功能。 结果:（1）经测序后得到正常黄瓜和芽黄突变体ClpP基因序列为494bp。可编码164个氨基酸。 从1到132氨基酸之间有S14_ClpP_2保守结构域，没有信号肽，推测其可能不是分泌蛋白。与预 测的黄瓜叶绿体合成全基因组比对发现，该基因有三个外显子，二个内含子组成，但本研究只获 得了两个外显子序列。将该