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细胞破碎的目的 细胞破碎的原因 由于有许多生物代谢产物存在于细胞内部，必须在纯化以前将细胞破碎，使胞内物质释放到液相中，然后方可进行提取 尤其是由基因工程菌产生的大多数蛋白质不会被分泌到发酵液中，而是在细胞内沉积。脂类物质和一些抗生素也是包含在生物体中。 破碎细胞的目的就是破坏细胞壁和细胞膜，增加其通透性，尽可能释放胞内的目标产物。 细胞破碎多用于小规模生产，在大规模生产中应用极少。 4.1 细胞壁 细胞壁：细胞膜强度差，易破碎，细胞壁坚韧，是主要的破碎阻力，植物细胞和微生物细胞具有细胞壁，破碎难度大，动物细胞没有细胞壁，破碎难度小。 不同微生物细胞壁具有不同的特性 酵母：葡聚糖的细纤维构成了细胞壁的刚性骨架，甘露聚糖形成网状结构，细胞壁破碎的阻力也主要决定于壁结构交联的紧密程度和它的厚度； 霉菌：细胞壁中含有几丁质或纤维素的纤维状结构，其强度比细菌和酵母菌的细胞壁有所提高；很难破碎 植物细胞：具有初生壁，次生壁；次生壁的形成提高了细胞壁的坚硬性，使植物细胞具有很高的机械强度，很难破碎。 利用溶解细胞壁的酶处理菌体细胞，使细胞壁受到部分或完全破坏后，再利用渗透压冲击等方法破坏细胞膜，进一步增大胞内产物的通透性。 利用溶酶系统处理细胞时必须根据细胞壁的结构和化学组成选择适当的酶，并确定相应的次序。 碱处理法和酶消化法相反，反应激烈，不具选择性，但成本低廉。 碱加入细胞悬浮液中后和细胞壁进行了多种反应，包括使磷脂皂化，使细胞壁的成分溶于表面活性剂，也使蛋白质变性。该法不仅破坏了细胞壁也破坏了产物。 该法多用于细胞破碎获取粗提物 三种主要细胞破碎化学方法中最简单的是渗透冲击法。此法将一定体积的细胞液加到2倍体积的水中，细胞中溶质浓度高，水不断进入细胞，使细胞膨胀，最后导致破裂。 渗透流的动力来自渗透压，渗透压可能很大。可以通过化学平衡来估算，水的化学电势是常数，即： μH2O (外) = μH2O (内) (4.2-1) 若胞内物为稀溶液，其偏摩尔体积等于纯水的摩尔体积。且x1很小时： Pout-Pin=(RT/--VH2o)×ln(1-x1) =(RT/--VH2o) ×(-x1-x2/2-x3/3) =-RTc1+ … (4. 3) 该式称为范特霍夫定律。 4、增溶法 该法是利用表面活性剂。最典型的是将体积为细胞体积两倍的某浓度的表面活性剂加入到细胞中。表面活性剂能将细胞壁破碎，制成的悬浮液可用离心分离除去细胞碎片，再用吸附柱或萃取剂分离制得产品。 4.3 物理破碎法 物理破碎法主要是利用高压、研磨或超声波等手段在细胞壁上产生的剪切力达到破碎目的.包括高压匀浆法,珠磨法和超声破碎法 高速珠磨机(high spced bead mill) 研磨是常用的一种方法，它将细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝等研磨剂一起快速搅拌，使细胞获得破碎。 在工业规模的破碎中常采用高速珠磨机 影响超声波的细胞破碎效率因素：频率、液体温度和粘度、处理时间等。 超声波破碎法是很强烈的破碎方法，适用于多数微生物的破碎。一般杆菌比球菌易破碎，G-细菌比G+细菌易破碎，对酵母菌的效果较差。 该法在实验室小规模细胞破碎中常用。 超声波处理细胞悬浮液时，破碎作用受许多因素的影响，通常声强和振幅影响很大，但强度太高易使蛋白质变性，频率的变化影响不明显：此外介质的离子强度、pH值、菌体的种类和浓度也有很大的影响. 超声波振荡过程中遇到的最大问题就是产生的热量不容易驱散，所以影响了它在大规模工业上的应用，但在实验室和小规模生产中是一种很好的方法 胶体磨 德国进口珠磨机 ZM系列卧式密闭珠(砂)磨机 利用发射15-25kHz的超声波探头处理细胞悬浮液。 一般认为超声波破碎的机理是：在超声波作用下液体发生空化作用，空穴的形成、增大和闭合产生极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎。 3.超声破碎法（Ultrasonication） * * Chapter 4 Cell Disruption 第四章 细胞破碎 ※ 4.0 Summary 概述 多聚糖（几丁质） （80-90%） 脂类 蛋白质 霉菌 初生壁 次生壁 葡聚糖 （30-40%） 甘露聚糖 （30%） 蛋白质 （6-8%） 脂类 （8.5-13.5%） 肽聚糖 （5-10%） 脂蛋白 脂多糖 （11-22%） 磷脂 蛋白质 肽聚糖 （40-90%） 多糖 胞壁酸 蛋白质 脂多糖 （1-4%） 主要组成 植物细胞 酵母菌 G-细菌 G+细菌 生物类型 微生物细胞壁： 细菌： 革兰氏阳性菌：肽聚糖层厚，难破碎 革兰氏阴性菌：肽聚糖层外还具有脂多糖，磷脂，脂蛋白，容易破碎 革兰氏阴性菌 革兰氏阳性菌 胆盐作用于大肠杆菌 适中