中国对虾（peaeus chinensis）主要过敏原的鉴定及性质研究.pdfVIP

中国对虾(Penaeus 摘 要 虾味道鲜美，营养丰富，深受消费者喜爱，但其同时也是联合国粮农组织 公布的8种常见的高过敏活性食物之一。本论文以原产于我国的中国对虾 (Penaeus chinensis)为研究对象，旨在获得有关中国对虾过敏原的基础数据， 为海产品过敏原的控制提供依据。首先，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对中国对虾过 c 敏原组分进行分析，经免疫印迹鉴定其主要过敏原Pen1；然后利用高效液相 c 色谱纯化Pen1：经苯酚．硫酸法、肽质量指纹图谱和红外光谱分析等方法对其 c 性质进行初步研究。结果表明Pen1为分子量36kD的糖蛋白；糖含量为4．4％； 检索出了17条吻合肽段；其二级结构存在0c一螺旋。 c 为研究Pen1的分子生物学特征，我们根据已报道的其它品种虾过敏原的 cl的基因并进行测序，结果显示 核苷酸序列设计引物，应用PCR方法克隆Pen Penc 同种属海产品的过敏原，运用生物信息学软件进行分析，研究氨基酸同源性并构 建系统进化树，结果表明不同海产品过敏原的氨基酸存在较高的同源性，并且其 亲缘关系越近其同源性也越高。分析免疫球蛋白E结合区域的9个肽段的抗原 表位，发现这些海产品过敏原中存在相同的抗原表位。除此之外，利用在线软件， 推测Penc1的二硫键，等电点，疏水性，二级结构以及O一糖基化位点等。 c 利用气相色谱分析Pen1的单糖组成；根据p消去分析其糖苷键类型：通过 表示扫描热量仪分析糖链对过敏原热稳定性的影响；以质谱为主要研究手段，确 c c 定Pen1的糖基化位点。结果表明：Pen1单糖组成有两种，它们分别是D．甘露 c cl的热稳定性；122位 糖和D．葡萄糖；Pen1中存在O．糖苷键；糖链能增强Pen c 天冬酰胺为Pen1的N一糖基化位点，第101苏氨酸为潜在的O一糖基化位点。利用 N．肽糖苷酶F专一酶切N．糖链；通过美拉德反应合成多糖与蛋白复合物：根据实 c 验建立起来的ELISA体系，测定糖链酶切前后、美拉德反应前后Pen1的过敏活 性变化。结果表明：N一糖基化位点以及潜在的o．糖基化位点均不在9个肽段的抗 c 原表位上，糖链对Penl的过敏活性影响不大。 c 通过胰蛋白酶水解降低Penl的过敏活性，采用三因素二次旋转正交回归设 计对水解反应的工艺参数pH值、水解温度(T)、酶和底物比(E：S)进行了优化。 建立了以反应过敏活性的OD值为响应值的二次旋转正交回归模型。方程通过F C 检验、t检验和应用验证，表明模型能较好地反映胰蛋白酶水解Penl反应体系的 运行规律，优化出水解条件为：pH值为8．12，水解温度为43．3。C，E：S为4．3U／g。 关键词：虾；过敏原；鉴定；性质 Identificationand of from propertiesmajorallergen Chinese chinensis shrimp，Penaeus Abstract and is w