中国肾形肾状线不同地理群体形态、分子及生物学特性研究.pdf

摘要 肾形线虫(Rotylenchulus 寄生植物根部，影响根系，特别是须根系的生长，严重的甚至造成根系的坏死，腐烂等症 状。属内10种线虫中，肾形肾状线虫(兄ren／form／s 式种，也是分布和寄主范围最为广泛的一类植物寄生线虫，寄主可达300多种，涉及农作 物、果树、蔬菜和观赏性植物。因其对棉花、荔枝、风梨、甘薯等都造成了严重损失，世 界上许多国家和地区将肾形肾状线虫列为检疫性对象。本研究对采自我国5省市的33个肾 形线虫群体进行了形态学和rDNA分子特征及肾形肾状线虫生物学特性进行了系统的研究， 主要研究结果概述如下： 1．通过对我国海南、广东、福建、浙江、重庆5省市植物根围1021份土壤样品的分离 和鉴定，总计发现33个肾形线虫群体，经形态学观察及形态测量值的比较，鉴定有关的33 个肾形线虫群体均为肾形肾状线虫，表明肾形肾状线虫是我国肾状属的优势种群。其中浙江 省和重庆市为首次报道。 2．进一步了解我国肾形肾状线虫群体的寄主情况，本研究中33个肾形肾状线虫群体寄 主涉及16科24属植物，其中龙眼为肾形肾状线虫的新寄主。 3．对采集到的肾形肾状线虫群体形态学观察，发现均为两性生殖群体，雌雄虫数量相 近。不同群体间未成熟雌虫和雄虫的形态学特征基本一致，除个别群体中的少量虫体尾部末 端存在变异现象。通过形态测量值与模式种及已报道群体比较，发现来自中国5省市的肾形 肾状线虫群体形态测量值大部分都在该种参考范围之内，但个别群体b值、c值、DGO及 透明尾测量值存在一定差异，系种内不同地理群体的差异。通过肾形肾状线虫HNl7群体雌 雄虫扫描电镜的观察，丰富了肾形。肾状线虫形态学特征。 4．PCR扩增我国肾形肾状线虫群体rDNAITS区并测序，结合GenBank上的肾形肾状 比较构建了系统发育树。结果表明：不同地理群体的肾形肾状线虫ITS区扩增片段长度约为 ITS区的PCR-RFLP及序列分析，将本研究中的33个肾形肾状线虫群体 800bp。基于rDNA 型。A型内肾形肾状线虫群体rDNAITS区序列较稳定，与上述GenBank中的两性生殖群体 和孤雌生殖群体序列相似度分别为98．6-100％和90．5．91．1％：B、C型肾形肾状线虫群体序 列与A型差异相对较大，相似度为94．0．95．O％，与GenBank中的两性群体序列和孤雌生殖 同地理群体的系统进化树，所有肾形肾状线虫群体聚为一类，该类又分为两性生殖与孤雌生 殖两个类群；两性生殖群体中A型与GenBank中登录的肾形肾状线虫两性生殖群体聚合在 一起，而B、C型聚合在一起，肾形肾状线虫两性生殖群体共形成了三个分支，该结果与肾 析和比对，结果显示：肾形肾状线虫两性生殖群体间rDNAITS、ITSl及ITS2都存在明显 的变异，其中ITSl较ITS和ITS2变异相对较大，两性生殖群体和孤雌生殖群体序列相似度 相对较低。 5．肾形肾状线虫不同地理群体28S RNA基因中D2D3区的PCR扩增及序列分析，结合 GenBank中登录的肾形肾状线虫28S macrodoratus28S RNA基因中D2D3区序列(DQ328711)进行比对分析，构建系统进化树。 结果表明：不同地理群体的肾形肾状线虫28SRNA基因中D2D3区扩增片段长度约为 D2D3区序列 DQ32871l相比较则差异较大，相似度仅为77．1。78．6％；本研究为国际上首次对肾形肾状线 虫种内各群体问的28SRNA中D2D3区进行系统进化研究，有关的肾形肾状线虫的分子数 据，对该虫的分子鉴定有直接的应用价值。 6．系统研究了我国肾形肾状线虫的生活史及繁殖力。通过对大豆的接种实验，确定了 我国肾形肾状线虫在27±2℃条件下，从侵染大豆根部到完成整个生活史需27d，肾形肾状 线虫的繁殖力随接种量的增加而降低。 7．肾形肾状线虫梯度接种烟草、番茄和黄瓜的实验结果显示：在接种量低于50条／盆 时，肾形肾状线虫的危害不明显，而接种量为500条／盆以上时，植株地上部和根系统生长 都受到影响，接种量为5000条／盆时，植株地上部严重矮化，根系统不发达，须根系很少； 肾形肾状线虫在三种寄主上的繁殖情况与接种大豆的趋势相同。 本研究将有助于肾形线虫的形态及分子分类的进一步研究，为了解我国肾形肾状线虫的