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双酰胺类杀虫剂性与敏感品系小菜蛾差异性cdna及鱼尼丁受体基因分析
一
目 录
中文摘要………………………………………………………………………………………．I
Abstract…………………………………………………………．……………………………………………．………．．III
1弓I言………………………………………………………………………………………………………………………．1
1．1双酰胺类杀虫剂的研究概况……………………………………………………………一l
1．1．1氯虫苯甲酰胺概述………………………………………………………………………1
1．1．2氟虫双酰胺的概述………………………………………………………………………1
1．2小菜蛾抗双酰胺类杀虫剂的研究进展…………………………………………………．3
1．2．1小菜蛾的发生及危害…………………………………………………………………一3
1．2．2小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗药性研究现状………………………………………．．3
1．2．3小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗药性机制研究现状……………………………………4
1．3昆虫抗药性基因表达差异分析方法……………………………………………………．4
1．3．1 RDA)……………………………………………．4
cDNA代表性差异分析(cDNA
1．3．2mRNA显示技术(DDRT)……………………………………………………………5
1．3．3基因表达系统分析(SAGE)…………………………………………………………6
1．3．4抑制性消减杂交(SSH)………………………………………………………………6
1．3．5eDNA微阵列(cDNA
Microarray)…………………………………………………．．6
1．3．6双向电泳技术(Two-dimensional
gel
1．3．7高通量测序技术………………………………………………………………………一7
1．3．8几种差异表达分析方法的比较………………………………………………………。7
1．4选题目的和意义…………………………………………………………………………．9
1．5本研究的技术路线………………………………………………………………………10
2材料与方法……………………………………………………………………………………1l
2．1供试药剂、试剂和主要仪器……………………………………………………………11
2．1．1供试药剂与化学试剂…………………………………………………………………11
2．1．2主要分子试剂…………………………………………………………………………11
2．1．3主要仪器…………………．，．．…………………………………………………………．．12
2．2供试昆虫与饲养…………………………………………………………………………12
2．2．1供试昆虫………………………………………………………………………………．．12
2．2．2试剂及培养基的配制…………………………………………………………………13
万方数据
2．3毒力测定及抗性选育……………………………………………………………………14
2．4分子试验方法……………………………………………………………………………14
2．4．1小菜蛾抗性品系与敏感品系的cDNA代表性差异分析……………………………14
2．4．1．1小菜蛾RNA提取…………………………………………………………………．．14
2．4．1．2小菜蛾总RNA纯度检测一分光光度法…………………………………………．．15
5
2．4．1．3小菜蛾总RNA完整性的鉴定一琼脂糖凝胶电泳………………………………～l
2．4．1．5小菜蛾双链cDNA的合成…………………………………………………………17
8
2．4．1．6制备检测子及扩增子………………………………………………………………．1
2．4．1．6．1扩增eDNA…………………………………………………………………………………………………19
2．4．1．6．3制各Tester……………
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