嗜线虫致病杆菌npt毒素酶解特性的研究.pdfVIP

摘要 HB310(Xn 嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus HB310)是与小卷蛾斯氏 nematophila 线虫(Steinernema 业害虫具有广谱的杀虫活性或抑制生长发育的作用，其杀虫活性组份为蛋白复合物 (简称Xnpt毒素)。前期实验通过制备型非变性凝胶电泳对胞内杀虫蛋白进行了分 rapae) 对小菜蛾(Plutella xylostella)和棉铃虫(Helicoverpaarmigera)具有较强的杀虫活 性。为了探索嗜线虫致病杆菌Xnpt毒：素的杀虫机理，本文研究了Xnpt毒素在昆虫中 肠内的酶解特性，同时对酶解产物进行了质谱鉴定分析。另外，在实验室条件下对嗜 线虫致病杆菌与苏云金芽胞杆菌杆菌Bacillus 同增效作用进行了初步研究。主要结果如下： 1．SDS．PAGE分析显示，菜青虫、棉铃虫、粘虫(Mythimnaseparate)、美国白 cunea)以及斜纹夜蛾(Prodenia 蛾(Hyphantria 素，并且酶解产物中也出现了约113kDa与60kDa的新蛋白条带，而市售胃蛋白酶、 中的XptA2蛋白高度匹配，故推测这两个酶解片段均为XptA2蛋白的酶解产物。 2．以小菜蛾和棉铃虫幼虫为试虫，测定了Xnpt毒素经不同昆虫中肠酶液和蛋白 酶处理24h前后的杀虫活性的变化，发现酶解后的Xnpt毒素仍保持原有的杀虫活性， 推测XptA2蛋白在昆虫中肠内有与Bt Cry蛋白毒素类似的酶解过程，可能XptA2蛋 白作为无活性的原毒素需要被昆虫中肠内的胰蛋白酶降解成更小的有活性毒素。 3．用Bt 指数为105．43的抗性种群(DBM—R)，该抗性种群对BtHD．1也具有一定的抗性，抗 性指数为30．70。在此基础上测定了嗜线虫致病杆菌HB310菌液对小菜蛾敏感种群和 抗性种群的杀虫毒力，结果表明，XnHB310菌液对抗性种群小菜蛾的抗性指标为 0．92，表明XnHB310与BtHD．73之间没有交互抗性。增效作用测定结果表明，Bt HB3 HD．73对XnHB310具有增效作用，而Xn10对Bt HD一73没有明显的增效作用。 关键词：嗜线虫致病杆菌；Xnpt毒素；中肠酶液；酶解作用；Bt；交互抗性；增效 作用 onthe of toxin fromXenorhabdus Study proteolyticpropertiesXnpt complexes nematophila Master Yun candidate：Yangyan Supervisor：ProfessorWangQinying InsectandPestControl Major：Agricultural Abstract HB3 1 inour insect Xenorhabdus 10《狮HB30)，screenedlaboratory,iS nematophila bacteria associat—edwith pathogen symbiotically entomopathogenic