小麦几丁质酶基的检测及酶活性研究.pdfVIP

中文摘要 几丁质酶(chitinase，EC3．2．1.14)作为一种重要的病程相关蛋白，一直是植 物抗菌基因工程的研究热点之一。同时几丁质酶也是一种诱导酶，多种生物和非生物 因素均可诱导几丁质酶基因的表达。本文从 NCBI 上 已经报道的小麦属几丁质酶 Chi1,Chi2,Chi3,Cht2,以及Cht4 五个基因序列中分析比较并用Primer 软件分别设计 了多对引物，对中国小麦微核心种质中随机选取的 94 个小麦品种和国内外的 260 个 小麦样品材料进行 PCR 扩增和琼脂糖凝胶电泳检测，并对部分小麦品种进行测序分 析；随后对 260 个品种中的 230 个样品进行小麦几丁质酶活性测定，并做了低温对照 试验，分析低温对小麦几丁质酶活性的影响，最后展望了将几丁质酶基因转入到优质 小麦以得到抗病体系的前景，主要结果如下： （1）在 94 份小麦材料中，Cht4 的引物均扩增出目的片段，Chi3 和 Cht2 也大部分扩 增出目的条带，而 Chi1 和 Chi2 的第一对引物扩增出的只有 37.2％，但第二对引物 却大部分都扩增出了目的片段。 在 260 个小麦品种的扩增结果中也大部分呈现这样的 趋势， Cht4、 Chi3 和 Cht2 的扩增率在85％以上， 而 Chi1 和 Chi2 的扩增率仍比较低。 虽然每种基因的分布情况不同，但每个小麦品种中至少有一种几丁质酶基因在起作 用。 （2）在对 8 个小麦样品进行测序分析后发现，前面 4 个品种扩增的片段所编码的蛋 白质氨基酸序列与Cht4 基因的同源性最高，属于 ClassⅣ几丁质酶基因；而后 4 个样 品测出的序列与Chi3 基因的同源性最高，均属于第Ⅲ类几丁质酶基因。 （3）酶活性测定结果发现大部分小麦几丁质酶活性在 200-600U 之间，酶活性均值为 421.26U，总体的酶活性比较稳定。低温处理后测定的酶活性均有不同程度的提高， 大部分增高范围在 0-200U 之间，升高倍数在 0.16％到 1.199倍不等，但总体增高幅 度比较小。这说明低温条件可以诱导小麦产生几丁质酶的表达，但是对酶活性的影响 不明显。 关键词：小麦，几丁质酶，检测，活性测定，低温 ­I­  Abstract  As a important PR protein，chitinase(EC3．2．1.14) has been a hot point of genetic  engineering of plant resistance to fungal diseases all time. Also chitinase is an inducible  enzyme; it can be induced by a variety of biotic and abiotic factors. This text based on  chitinase gene of wheat Chi1, Chi2, Chi3, Cht2, and Cht4 from NCBI, some pairs of  primers were designed, to do PCR method with the randomly selected ninety­four wheat  Varieties of Mini­core Collection of Chinese Wheat Varieties and two hundred and sixty  wheat Varieties from home and abroad. At the same time, some of them were analyzed  with the sequences. Then based on the low temperature on 230 wheat varieties of the 260  wheat varieties, determine the changes and analyze the effects of wheat chitinase activity  before and after treatment,  and at  last this  article shows the prospects  of tran