橡胶树cbf信通路相关基因的克隆表达及hbcbf1功能研究.pdfVIP

摘 要 在橡胶生产上，非生物胁迫严重影响了橡胶的产量，特别是低温、干旱。近几年 来，利用植物分子生物学技术来提高植物的抗寒、抗旱能力的研究进展十分迅速。特 别是，一类能调节许多抗寒、耐旱和耐盐相关基因COR(CoIdResp0璐iVe)的转录激 F粥衄)的研究甚多，它位于冷应答调控网络的节点 活因子CBF(CmRE．Birlding 上，能激活下游众多与抗逆有关的功能基因的表达。目前对CBF途径的研究是众多 冷应答途径中最为透彻的，功能最为明确的，也是植物抗寒分子育种目的基因的首选。 本研究以巴西橡胶树(胁B懈姚珊西)为试验材料，通过同源克隆的方法，从冷 处理的橡胶树中分离到CBF冷应答途径上的几个相关基因；对它们进行了序列分析、 功能预测、表达模式分析以及转化拟南芥的功能鉴定，内容概括如下： 断．序列分析显示，保守片断l来自本实验室已获得的册C8FZ；片断2则与拟 南芥AP2／EI冱BP类转录因子有很高的同源性。 box 的启动子序列，存在Gap 2和I．box。 3．通过对巴西橡胶树冷处理c研叮A全长文库的序列筛选，获得与抗寒、抗旱相关的 基医HbDREB2B帮HbRD22。 而言，册CB心被诱导的更为迅速；对于干旱胁迫，励c刚没有应答，说明其 参与冷应答过程与干旱诱导途径互为独立；而王汤C引叼则能迅速被脱水胁迫所诱 导表达；肪舢船能被低温和干旱诱导，且表达丰度不受胁迫时间影响：肋足D22 亦能被低温和干旱诱导，能迅速增加表达量，但随着胁迫时间的增长，表达量随 之减少，甚至低于正常状态下的表达丰度。表明同类基因表达和功能具有多样性。 5．筛选鉴定出一些肋侧转化拟南芥的纯系植株。通过No舳杂交实验显示， 励，C引吖在组成型强启动子C|口^形罗船驱动下，能在正常生长条件表达，并且能诱 导拟南芥CORl5a和RD29a基因的表达；在冷处理和干旱处理的情况下，励C醒， 一的诱导效果则与拟南芥中内源CORl5a的表达途径叠加：另一方面却抑制了 RD29a的表达。 I 6．测定了三个转化株系的抗寒、抗旱相关生理指标，结果显示册侧增强转化植 株的抗寒性，却有可能限制了其抗旱能力． 综上所述，非低温驯化的巴西橡胶树中也存在CBF冷应答途径，说明热带植 物在抗寒分子机制方面同源具有保守性，克隆得到的基因具有潜在的抗寒功能； 同时，同源基因间表达谱的差异有揭示它们功能上的多样性和复杂性；转化植株 的功能鉴定，表明册硎在功能上与同源拟南芥侧具有相同性也存在差异 性，需要更多的同源基因的筛选、鉴定，为橡胶树抗寒分子育种提供最佳的目标 基因。 关键词：巴西橡胶树：CBF；冷应答途径；拟南芥；转基因 Ⅱ Abstract Rl妇r is abiodc t11e productiona腩c“甜serio峭lyby fact0取eSpecially of cold 10w曲即1pera：ture觚d血ed1．0IIght．IIl托centye哪，mestudyenh如ciIlgplant aIld tolerance droughtutil娩ingplantmolecul盯biologytechIliques developedr印idly．One killd w弱 of坞gIllon’劬ichcom】砸sed们璐cri砸∞f．actor stIldiI甜iIld喊1．T1lis locatediIl