恶臭假单胞菌a菌株抗tmv的活性小分子物质分离及作用机理研究.pdfVIP

捅 要 mosaic 由烟草普通花叶病毒(Tobaccovirus，TMV)引起的烟草病毒病是我国烟草上主要的 病害之一，是影响我国烟草产量和质量的主要制约冈素。目前，抗植物病毒剂的防治效果并不理 想，并且化学农药的火量使用，引起了一系列令人担忧的环境和社会问题。从可持续发展的角度 考虑，发展能产生高效、高活性的生物源抗病毒剂是实现产业化生物防治的关键任务。生物农药 存在多种防治策略，其中之一就是应用微生物的次级代谢产物。 本研究从TMV重病区中朱发病的K326烟株根际土壤中筛选出对TMV具有高度拮抗活性菌 株A3，结合其生理生化特性鉴定以及16SrDNA序列分析鉴定的结果，判定菌株A3为恶臭假单 胞菌(Pseudomonasputida)。并通过试验筛选出A3菌株适宜的摇瓶发酵条件：NB培养基为适宜 mL／250 h．72 mL、发酵时间60h，适宜的 培养基、初始pH7．0、适宜发酵温度28℃、通气量100 碳源为葡萄糖，适宜的氮源为酵母膏或蛋白胨。同时，本研究对菌株发酵液的活性物质进行了分 离纯化，最后采用气相色谱．质谱联j{j(GC／MS)的方法进行化学分析和结构鉴定，共得剑38种化 合物，其中酮类化合物、醇类化合物居多。 此外，本研究以三生．NN烟和普通烟NC89为寄主材料，对活性小分子物质拮抗TMV的作 朋机制做了初步探索。电镜观察表明活性物质能破坏TMV粒体的完整性，使病毒粒子断裂并且 排列凌乱无序。对病毒．寄主互作中，活性物质对烟株处理后能诱导植株体内PR基因表达上调， 诱导植株产生系统抗病性。 同时，以不同浓度的吐温-20作为表面活性剂，与菌株发酵液混合后喷施4．5叶期NC89，于 不同时间接种TMV，确定该菌用于生产的最适宜剂型和浓度。试验结果表明，0．25％的吐温．20 较利丁菌株A3作用于烟叶表面，喷施l d后接种TMV，能更好的抑制烟草病毒病的发生。利用 real-time RT-PCR对云南腾冲和广西隆林2个植烟区十壤中TMV的含量进行了定量检测，检测该 降低了TMV发病率。该研究结论将为农作物TMV病毒病的生物防治与无公害食品的生产提供 新的研究思路和方法。 关键词：烟草瞥通花叶病毒，拮抗细菌，活性小分子物质，作用机制 Abstract Tobaccomosaic oneofthemost viruses severe tO virus(TMV)is importantcausingdamageyield losses．Thecontroleffectsand ofantiviralalenotas as andseriouseconomic security agent 900d tiU u∞ofchemicalscausesaseriesof demands extensive people’S nOW．However，the alarming environmentalandsocial antivirus with and problems．Developingproductshi曲efficiencyhi曲 isthe missionof diseasebiocontrolforsustainable areseveral activitykey plant development．There control of ofwhichisthe ofmicrobial strat