海洋细菌tc-防治香蕉枯萎病及抗菌蛋白抑菌的机理初步研究.pdfVIP

海洋细菌TC-1防治香蕉枯萎病及抗菌蛋白 抑菌的机理初步研究 摘要 海洋生防细菌TC．1对多种植物病原菌有明显的抑菌效果，本研究以香蕉枯萎病 菌为指示菌，通过盆栽试验，研究了生防菌TC．1的防病促生机理：对其抗菌蛋白进 行了分离、纯化、鉴定以及抑菌效果、抑菌机理的研究。结果如下： l、通过香蕉苗的盆栽试验，从定殖特性、防病促生效果、诱导抗性等方面研究 了海洋生防细菌TC。1对香蕉枯萎病的生防机理。 d后，香蕉根部、茎部 (1)生防菌TC．1能在香蕉体内和根际土壤定殖。接种120 cfu／g， 表现出良好的环境适应性和稳定性。 顺序无显著影响(PO．05)。 (3)在未接种香蕉枯萎病菌时，海洋细菌Tc．1处理的香蕉苗与未处理的5种防御 酶和多酚氧化酶活性分别提高了248．1％和12．0％；9天后，苯丙氨酸解氨酶和超氧化 物歧化酶活性分别提高了16．O％和10．0％；12天后过氧化氢酶活性提高了363．O％。 2、海洋生防菌株TC．1的无菌发酵液，经过100℃水浴20min后离心，用饱和度 G．50柱层析系统纯化， 为50．60％硫酸铵沉淀得到抗菌蛋白粗提物，经过sephadex SDS．PAGE电泳检测，获得分子量为50kD和38KD左右的两条电泳纯的抗菌蛋白条 带，切胶回收，进行全质谱分析，共鉴定出9种抗菌蛋白，分别为：与调节基因相关 家族蛋白、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、与延伸因子相关酶、调节某一代谢途径的酶、 与DNA结合蛋白家族、与蛋白合成相关酶、未知功能蛋白和外切水解糖基化蛋白家 菌蛋白为耐高温的中性蛋白酶和碱性蛋白酶。 3、通过研究海洋生防细菌TC．1对孢子萌发、菌丝和孢子形态、细胞膜通透性和 细胞壁的结构等方面的影响，探索了菌株TC．1对香蕉枯萎病菌的抑菌机理。 (1)抗菌蛋白对香蕉枯萎病菌孢子萌发的影响。通过对抗菌蛋白的梯度稀释，处理 I 相同浓度的香蕉枯萎病菌孢子悬浮液，测定抗菌蛋白抑制香蕉枯萎病菌孢子萌发的 ECso为11．97肛g／ml，在抗菌蛋白为浓度为14pg／ml时，抑制率为70％。 (2)经抗菌蛋白处理的香蕉枯萎病菌菌丝和孢子形态有明显变化。菌丝畸形，在菌 丝和孢子顶端、中部出现膨大泡囊，菌丝表面变粗糙；膨大泡囊表面凹凸不平，孢子 出现膨大、溢缩，并残留有碎片。 处理香蕉枯萎病菌的孢子悬浮液，测定电导率。结果表明在不同时间，处理后的电导 率比对照明显升高，说明抗菌蛋白可通过破坏细胞膜通透性起到抑菌作用。 处理香蕉枯萎病菌的孢子悬浮液，测定碱性磷酸酶的含量变化。结果表明，经抗菌蛋 白处理后的培养液，碱性磷酸酶活性明显增强。据此判断：抗菌蛋白可通过破坏细胞 壁的结构起到抗菌作用。 关键词：海洋细菌TC．1，香蕉枯萎病菌，抗菌蛋白，抑菌机理 Ⅱ MechanismofMarineStrain B TC-·1 anana preventing and vascularwilt antifungalproteinInhibiting oxysporum Race4 f．sp．cubense Abstract MarinusBacillusstrain TC一1isa biocontrol a of