水稻tfl2基的克隆与转化.pdfVIP

水稻TFL2基因的克隆与转化 摘要 花发育的分子遗传学研究是90年代以来植物发育分子生物学的一个研究热点。 近年来，随着对双子叶植物花发育机制研究的深入，双子叶植物花的诱导、形成以 及花器官分化的分子遗传学机制己创立。但是，对单子叶植物花发育过程的分子机 制研究还不深入，因此对单子叶植物水稻花器官发育的研究，对植物发育生物学与分 子生物学的发展有着重要的意义。 TFL2是一成花基因。在双子叶模式植物拟南芥中，TFL2主要表达在维管束及 植株分生组织，延迟开花时间，突变体tile主要表现为早花和顶端花。TFL2基因表达 1)的同系物——LHPl。若能清楚了解TFL2基因 产物是HPl(heterochromatinprotein 在其他植物的表达情况，将具有重要的现实意义。 本研究以水稻作材料，利用PCR扩增技术从水稻栽培品种农垦58N中克隆到 TFL2基因目的片段，构建TFL2基因超量表达及RNA干扰载体，并利用基因转导技 术，获得转基因植株，以期通过对转基因水稻的细胞学和表型分析来研究TFL2基因 的表达调控和功能。 Promoter、Noster、TFL2RNA 首先，我们将扩增到的35S RNAi)目的片段、TFL2超量表达(TFL2 RNAi以及pUCl8．乃琵2 中间载体176#和pUCl8中间载体中，命名为176#．TFL2 RNAi 和pCAMBIAl301．TFL2 胚愈伤组织作为转化受体材料，将构建好的重组质粒与含有潮霉素基因的5群质粒混 合，基因枪轰击后，26。C暗培养48小时，转入筛选培养基进行筛选。经过3代(2周／ 代)时间筛选，获得抗性愈伤组织，将生长旺盛的愈伤转入分化培养基培养，数周后 获得再生转基因植株。 目前，已获得PCR检测过的9株阳性转基因苗，其中TFL2RNAi有4株，剩 余5株为TFL2 overexpression阳性转基因苗。由于转基因植株还处于苗期，目前只 是用PCR扩增方法检测了转基因植株的阳性率，其表型变化不大，现在还无法观 察到生殖发育时期，特别是枝梗分化到开花这段时期的表型性状，因此还必须等待和 观察转基因水稻后期的生长，才能进一步验证该基因的功能。 关键词：TFL2基因；克隆；转化；转基因；水稻 Ⅱ m2inRice CloneandTransformationof Gene DengPingrang 530004，China) ofAgriculture，GuangxiUniversity,Nanning (College ABSTRACT Thestudiesonmolecularofflower havebecomea in genetics development hotspot thefieldofmolecularof since1 the biologyplantdevelopment furtherresearchonthedicotflower molecularmechanism genetic develepment，the relatedtofloral