水稻sp1 1互作基因的克隆与功能鉴定.pdfVIP

湖南农业大掌博士掌位论文 水稻@111互作基因的克隆与功能鉴定 1互作基因的克隆与功能鉴定 水稻Spll 摘 要 水稻假病斑基l司spm(spotted leafll)能通过泛素降解作用，负调控细胞坏死 及假病斑的形成。Splll突变体在自然条件下形成假病斑，从而提高对稻瘟病菌 和白叶枯病菌的抗性。为确定参与Splll基因调控抑制细胞死亡和防御反应过程 的物质，本研究通过酵母双杂交体系，以SPLl 1为诱饵，筛选水稻cDNA文库， 间存在中度或强烈相互作用。BLAST同源蛋白功能分析结果表明，SPINl编码一 域的RNA 未检索到相关功能。 体，并对功能进行了鉴定。通过遗传转化及PCR鉴定共获得了多个阳性后代： 后代46个株系，超表达阳性后代9个株系。对阳性后代进行白叶枯病菌和稻瘟 病菌抗性功能鉴定发现，RNAi株系中，仅SPIN4后代对白叶枯病菌抗性增强； 对部分稻瘟病菌抗性增强。另外，研究中还发现SPlN3超表达后代PAL酶活性 参与了SPLll介导的泛素降解途径，但基因的确切功能还需在后代中作深入、 详细研究。 关键词：水稻、酵母双杂交体系、splll、SPIN、RNA干扰、超表达、稻瘟病、 自叶枯病 湖南农业大掌博士掌位论文 水稻@111互作基因的克隆与功能鉴定 Isolationand Characterizationof硒ceGenes withl1 InteractingSpl Abstract 1 isa ofcell defense in deathand rice．It spll negativeregIllmor response encodesaU-boxE3 thatis involvedin ligase protein ubiquitination-mediated degradation．To substratesoftheSPLll a identifyputative protein,weperformed theSPLll√堰M domainasthebait． yeasttwo-hybrid(Y2哪screeningusing repeat differentSPLl1 or identified． Eight interactingproteinsSPINs(SPINl一SPINS)were for have SPIN6．all intermediateto interactions、析thSPLlls Except proteins strong ARM domain．SPINlencodesaK RNA—binding encodesa of chain prote