生姜紫黄质脱环化酶基因（gvde）的克隆、表达、功能及其调控.pdfVIP

摘要 offwinaleRose．)是姜科、姜属能形成地下肉质根茎的栽培种，为多年生草本 生姜(Zingiber 植物，作一年生蔬菜栽培。原产子我国及东南亚等热带森林及雨林区，长期系统发育的结果使其 形成了耐荫不耐强光的特性。在强光下特别是晴天中午生姜植株的Pn、AQY、F川m下降。同 时生姜的生长季节在夏秋两季，是一年四季中光照最强的时期，喜温而不耐强光的生姜生长在这 样的季节容易发生光抑制现象，甚至光氧化。在光抑制过程中生姜自身有一定的保护机制。本论 文以山东莱芜生姜为试材，克隆了生姜体内的VDE基因，通过转基因技术获得转基因植株，研 究其在强光下的表达；并对生姜叶片进行外源AsA、ABA处理，研究了两者对生姜叶片光抑制 的保护作用，获得如下结果： 1 利用GenBank上已经登陆的紫黄质脱环氧化酶(圮崛)基因序列，设计简并引物，通过 基因的3’和5’末端。根据已经获得的基因序列设计引物扩增了GFDE基因全长。测序结果表 其氨基酸序列和拟南芥，烟草，小麦，水稻分别有61％、59％、59％、63％同源性，且具有典型 的VDE特征。 Reading 酶切和测序鉴定证实GVDE基因的ORF区已经反向插入到表达载体上。然后将构建好地表达载 体(含目的片段)通过农杆菌侵染法侵染烟草叶片，利用抗生素筛选得到转基因烟草植株。转基 因烟草先通过PCR-Southern排除转基因的假阳性。然后对转基因烟草中的VDE表达和在强光下 的保护机制作了进一步研究，结果表明，转基因烟草的Nl叼和Fv／Fm都低于对照，APX、SOD 和POD等抗氧化酶活性也低于对照植株。 3强光照射下不同浓度AsA处理对生姜离体叶片光抑制的作用研究。结果表明，较低浓度的 和qN维持较高水平，抗氧化酶活性也较高。说明外源AsA对强光引起的叶片的光抑制有一定的保 护作用。 的CA+z)／(AH升v)、抗氧化酶活性等高于其它处理和对照。总的来说，在所有的AsA处理中，以 250mM AsA处理对活体叶片表现最好，热耗散能力增强，抗氧化酶活性较高，能够在一定程度 上保护生姜叶片在遭遇强光胁迫下光合机构受过剩光能的破坏，活性氧清除能力加强。 4在强光条件下，经不同浓度ABA处理生姜离体叶片I孢Fv／Fm、中PsIl、NPQ比对照有所提 ABA浓度处理为最佳，Fv／Fm，中PsII维持较高水平，热耗散能力增强，APX、DHAR活性也较高。 咀生姜活体叶片为试材，用不同ABA浓度处理后的研究结果表明，无论是对照还是ABA处理 的生姜活体叶片的Fv／Fm、OrslI、Fo在强光下呈下降趋势，说明生姜叶片在强光下发生光抑制。 等普遍高于对照。同时ABA处理提高了生姜活体叶片的抗氧化酶活性。其中以2009MABA处理为 最好，具有较高的NPQ、Fv／Fm、中PsII和F0，缓解了光合作用的光抑制，且清除活性氧的酶类活 性也高于其它处理。 ABA 关键词生姜GLIDE基因克隆AsA NPQ抗氧化酶 II Abstract a ofthe Rose．)isspeciesfamilyZingiberaceae．Theoriginalproducing Ginger(Zingiber．officinale areaandrainforestaressuch嬲chinaandsoutheastofAsianandsoon．The was forest regiontropic long in formedthe tobearshadeandnotendure developmentginger ability highlight．Pn， pedodofsystem