烟草体内维生素6代谢的研究.pdf

摘要 维生素 B (VB )是一类化合物的总称。近年来研究发现 VB 在植物体内发挥 6 6 6  抗逆作用。烟草作为模式植物其体内 VB 的存在形态还未见报道。本研究采用 6  高效液相色谱荧光检测技术对烟草体内 VB 的存在形态进行了分析。结果表示： 6  土壤栽培烟草叶、茎和根中 VB 的含量依次为 2.9、1.7、3.0 μg/g 鲜重；组培烟 6  草叶片的  VB 含量为  3.9  μg/g 鲜重，构成比为磷酸吡哆胺(PMP)7%、吡哆胺  6  (PM)14%、磷酸吡哆醛(PLP)19%、吡哆醛(PL)29%、吡哆醇(PN)30%；组培烟草 在连续 3 周的检测过程中，PLP 和 PL 含量下降、PN 含量上升，VB 总量保持 6  相对稳定。研究结果有助于以烟草为材料，进一步开展植物体内 VB 代谢机制 6  和特殊生理机制的研究。 本文通过构建组织培养模型，在组织水平上探讨植物体内的代谢机制。采取 在 MS 培养基上外源添加 VB (PM，PL，PN)干涉植物的生理环境，采用应答分 6 析的方式，系统分析 VB 的存在形态。取烟草叶片组织加液氮研磨加提取液得 6  到粗酶液，测定相关代谢酶的酶活，分析 VB 相关代谢酶酶活变化为应答分析 6  提供依据。外源添加 PM 后叶片中PM 增加到 54倍，PL增加到 7.7倍，PN 增加 到 11倍；外源添加 PL后叶片组织中 PL增加到 12倍，PN 增加到 28倍，PM 增 加到 9倍；外源添加 PN 后叶片中PN 增加到 40倍，PM 增加到 4 倍。以上三种 不同处理并未引起 PMP、PLP 量得变化。三种处理 VB 总量都显著变化。 6  为了分析植物吸收 VB 的方式，通过在 MS 培养基中设置不同的梯度，分析 6  添加量和吸收量的关系，发现烟草吸收 VB 的方式为自由扩散。 6  本实验摸索出烟草 VB 体外代谢相关代谢酶的最适反应条件，发现 PL激酶 6  最适 pH 5.5  反应时间 3 h，PNP/PMP氧化酶最适 pH 9.0 反应时间 2 h，PLP­磷 酸酶最适 pH 5.5  反应时间 10 min，PL还原酶最适 pH 7.0  反应时间 2 h，PM­丙 酮酸转氨酶最适 pH 11，反应时间2 h。反应温度都为 37  ℃。 在上述最适 的酶反应条件下测得各酶 的酶活分别为  PL  激酶  0.03  ±  0.01nmol/min/g 鲜重，PNP/PMP氧化酶  0.12 ± 0.01 nmol/min/g 鲜重，PLP­磷酸 酶 179.71 ± 41.46nmol/min/g 鲜重，PL还原酶 0.78 ± 0.04 nmol/min/g鲜重，PM­  丙酮酸转氨酶 2.14 ±0.15 nmol/min/g鲜重。VB 进入植物体内，引起体内VB 量