油菜nsa cs恢复基因的分子标记及恢复系菌核病的抗性鉴定.pdfVIP

摘 要 细胞质雄性不育是杂种优势利用的主要途径，其作为生产杂交种的一个主要授粉控制系统在 提高油菜产量上具有举足轻重的作用。目前国内外报道的油菜细胞质雄性不育类型很多，但是真 正应用于生产的非常有限，我国目前应用比较广泛的是Pol不育胞质，但是其应用的单一性使流 行病害的风险加大，不利于油菜生产的可持续发展。因此，创建和发掘新的细胞质雄性不育系统 势在必行。油菜野芥细胞质雄性不育(NsacMS)是在上述背景下通过原生质体融合得到的一个 新型不育系统，该不育系统育性稳定，低温条件下极少产生微量花粉。但异源细胞质雄性不育的 恢复源较为狭窄，通过测交筛选基本上难以在栽培种找到恢复材料，恢复材料的改良和选育全部 依赖杂交转育。而优良恢复系的选育是利用油菜异源细胞质雄性不育系统配制高纯度杂交种的必 要前提。我们在体细胞杂种可育后代的衍生株系中分离纯化出了自身稳定性良好、恢复能力强的 恢复系，成功实现了三系配套。为加快野芥异源细胞质雄性不育系统优良恢复系的培育，我们对 现有恢复系的恢复基因和菌核病的抗性进行了相关研究，主要结果如下： 株构建的不育池和可育池中寻找可以扩增出差异性条带的引物。筛选结果从180对AFLP引物中 找到差异性引物17对；94条RAPD引物中找到差异性引物lO个：96对SSR引物中找到差异 性引物2对： 170对SRAP引物中找到差异性引物30对。 2利用寻找到的差异性引物进行群体分析验证，得到4个SRAP恢复基因的分子标记，role8， 其他3种标记方法未找到与恢复基因紧密连锁的分子标记。 3引物m9e10扩增的恢复基因分子标记经过回收、测序、设计SCAR引物，已成功转化为 SCAR标记，将此标记定义为SCAR28l。该标记与恢复基因的遗传距离为3．1cM。 4通过离体叶接种，牙签接种，以及田间自然侵染等方法的鉴定，经过方差分析得到所选恢 复材料7330后代接种后与所选对照品种的差异均达到了显著水平，初步认定Nsa恢复材料的抗 病性强于所选对照品种中双4号、中双9号、中油821，进一步的验证仍在继续。 定来分析油菜抗菌核病的抗性机理。其中三种酶的活性在Nsa CMS恢复系中比所选对照品种中 双4号，中双9号，中油821强，说明三种酶在菌核病的抗性上却有着一定的防御作用。 关键词：油菜，NsaCMS，恢复基因，分子标记，菌核病 Abstract CMSisthemain forheterosisutilization．Asa control of approach majorpollinationsystemhybrid adecisiverolein the of CMS improvingoutputrapeseed．At production，itplays present,several havebeen afewofthemareusedin CMSis systems reported，butonly rapeseedproduction．Polwidely in of the usedChina the rapeseed increasesriskof presently，butsingularity hybridcytoplasm epidemic diseaseandaffectsthesustainable of and of development rapeseedproduction．S