香蕉果实炭疽菌伏侵染香蕉果实抑制差减cdna文库的构建.pdf

摘 要 香蕉果实炭疽病是一种典型的采后病害，也是极难防治的潜伏侵染病害。目前， 国内外对进行香蕉果实炭疽菌潜伏侵染香蕉果实分子生物学机制的研究未见报道，为 此，我们开展了这方面的研究工作。本研究旨在分离香蕉果实炭疽病病程相关的特异 表达的基因，进而推断这些基因在香蕉果实炭疽病发病过程中的作用。本实验总共分 离和接种了50个炭疽菌菌株，从中筛选获得了香蕉果实炭疽菌(cD耽幻驴记^“m小船韶) 强致病菌株F1。对七到八成熟度的无炭疽菌侵染的巴西蕉果接种炭疽菌F1为处理组， 同时以接种空白培养基为对照组。结果是接种炭疽菌3d未见病斑，5d病斑出现，7d 病斑明显。本实验选取接种炭疽菌5d后病斑出现的香蕉果皮为Te姗和对应天数的 组子，随机挑选70个重组子的cDNA插入片段进行了序列测定，并对它们进行Bl砌， Bl跳同源性比较。 结果表明：7个cDNA序列与数据库中功能未知的核酸序列的同源性达60．90％， 未被报道过的cEINA片段5个，约为10％，它们可能代表新基因。 为了进一步了解功能推测的克隆片段有哪些涉及到抗病与防御相关基因，从克隆 括几丁质酶、丝氨酸／苏氨酸激酶、异黄酮还原酶相关蛋白、富含亮氨酸重复序列、 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸辅酶、类受体激酶等，这些化合物参与了抗病反应的基本 过程．． 分析，结果发现这些基因在被接种炭疽菌侵染前没有表达，侵染后的表达量均有不同 程度的提高。同时说明所克隆到的差异表达的cDNA片段确实是香蕉基因组所编码 的，并且是接种炭疽菌后菌丝与果皮开始互作时到5d病斑出现这一病程表达的。另 外，揭示这些基因在病原与寄主互作中起着不同的作用。从而也证实了SSH中获得 的cDNA基因片段的正确性。 本研究采用SSH方法构建了炭疽茵侵染香蕉果实早期果实内部特异表达基因的 差减文库，并进行了基因功能的推断。获得了部分抗病相关基因片断，为下一步的研 究提供了基础。 关键词：香蕉：炭疽菌：病程表达基因；抑制差减杂交：cDNA序列 cDNA Establishmentofa subtractiVe Suppression libra秽丘Dm BallanaFmitontheLatentInfectionofCD耽幻护耙乃掰珑朋玉心口g Abstract h越la耄e躐通南醮i熊 8鑫酝髓觚重跹鼬毽c∞Se碱馥is鲫ie羹poS畦蹬Ve蘸蓬s髓se it aboutm01ecul越 charact耐stic．Andalsoistoodifficuntoc0曲期I．1krc i8∞r印011t 蕊∞殛匠s礅oa氇el蠢圭e域iⅢ＆lio蠹ofk蛙缓照至如主耄国玩彩扫磁溯2删l璐孵do掇e靠c锻避 abroad．1h oftllis isolateand purI，ose research、Ⅳ弱t0 identi玲thegenes删ch tlle ba薹：嘲媳觚t toin诧r≤he Sp∞ifieally勃【pres∞d出lringp∞ce姻of 锄mr0∞se，强d 鼬c畦on s柏泌 of thIe弦‰genesis—relatedgenes．n鼬u曲删ion雒d诚脚lat主。糕50 of their o抛幻护站知^册埘螂谢 D讹幻扩缸厅铂啊，wecomparedpa：tllogemci够Wbgot Fl，端矗i