黄曲霉毒素b1体金免疫层析试纸条的研制.pdfVIP

摘要 III 摘要 黄曲霉毒素B1(aflatoxinB，AFBl)是寄生曲霉(Aspergillus (A．flavu)的二次代谢产物，具有很强的致癌性。许多粮油食品、饲料等都容易被 AFBl污染，严重威胁人类健康和畜禽生产。几乎所有国家和地区都规定了农产品、 食品和饲料中AFBl的最大允许含量，并作为强制性检测标准进行检测。目前的 检测方法大多需要专门的仪器设备并且操作繁琐，无法满足现场快速检测的要求， 因此建立简单、快速、高效的AFBl检测方法具有重要的意义。 制原理，成功研制了AFBl胶体金免疫层析试纸条，其灵敏度、特异性、稳定性 等基本能达到检测要求。 鼠腹腔，采用体内诱生腹水法制备抗AFBl的腹水。腹水经辛酸．硫酸铵法纯化并 作质量鉴定，考马斯亮蓝法测定单抗蛋白质浓度为1．526 mg／mL；酶联免疫吸附法 (ELISA)测定抗体效价为1：6．4x104，IC50为0．218n∥mL；交叉反应结果表明单 抗特异性良好。 (2)采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，以金标AFBl单克隆抗体作为探针， 间接竞争胶体金免疫层析检测体系(GICA)。标记探针中金溶胶最佳粒径为24姗， 最佳包被抗原浓度为0．3酬，金标单抗量为O．5lxg／mL，金标液的最佳稀释度为 4倍稀释。GICA目测检出限为5 min。试纸条对AFB2、 ng／mL，检测时间为5～10 交叉反应。 的AFBl标准品添加到未污染AFBl的玉米粉中，制备不同污染程度的样品。分析 时，检测线和质控线均为红色；高于3ng／mL时，仅质控线为红色，同时以ELISA 法做验证实验，结果表明试纸条能够基本满足检测要求。 试纸条检测的最大优点是无需借助仪器，所需试剂已固定在试纸条上，检测 快速、简便，lOmin内可出检测结果，适用于对AFBl进行现场检测。 关键词：黄曲霉毒素B1；胶体金；免疫层析试纸条 Abstrac：t V ABSTRACT B Aflatoxin1 are metabolites carcinogenicsecondary by producedprimarily flavusand Callbe in Aspergillus A．parasiticus．Theypresent andothercommoditiesassociatedwithhumanfoodoranimal 1 has feeds．AflatoxinB been inhumanhealthandanimal feeds．So，most implicated controllinggovernment worldwidehave theamountofaflatoxinB1 allowedin agencies regulationsregarding humanandanimal detecteditas standard．Thedetection foodstuffs，and compellent methodsofAFB1nowa