粘虫颗粒体病毒苏云金杆菌增效作用及应用.pdf

徐健：粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌增效作用及应用 粘虫颗粒体病毒对苏云金杆菌增效作用及应用 (扬州大学园艺与植物保护学院，江苏扬州，225009) 研究生：徐健 导师：祝树德 教授 吴进才 教授 摘 要 苏云金杆菌(肋cf刀螂历“，．概啦珊捃，Bt)是研究应用最为广泛的生物杀虫剂，实 际使用中存在作用速度慢、防效低等弱点。美洲粘虫颗粒体病毒(风P删比砌 “订勿姗c幻g删mlosis (Baciluvims)，能提高核型多角体病毒(nuclearvims，NPV)的侵染能 polyhedrosis 力及Bt的毒力。本文以Bt和东方粘虫P．J印口阳幻转主增殖的美洲粘虫颗粒体病毒 对杀虫晶体蛋白的酶解活化、昆虫中肠酶活性的变化、昆虫中肠围食膜(peritrophic 白基因并原核表达了增效蛋白；研制了PuGv．Ps对Bt的增效制剂，并明确了其应用 效果。主要结果如下： 1明确了Pu(ⅣPs对Bt的增效作用 以小菜蛾Pz“幻如叫加坨妇、甜菜夜蛾 印。却饱m甜元掣口、棉铃虫肫比Dvgp口甜聊f{尹阳为试虫，采用生物测定方法测定了 具有增效作用，共毒系数达127．146。高温灭活的PuGv．Ps对Bt同样具有增效作用， 对小菜蛾的共毒系数达135．8，说明PuGv．Ps中含有对Bt毒力增强作用的增效因子。 PuGv-Ps可以提高Bt对小菜蛾的杀虫速度，250 饲喂棉铃虫死亡率也得到相应提高。PuGv-Ps还能增强Bt对甜菜夜蛾生长发育的抑 制作用，表现为幼虫生长量相对减少、蛹重下降、化蛹率降低和化蛹历期延长。 2分离纯化了PuGv-Ps增效蛋白并测定其对Bt的增效活性用PuGv感染东方 扬州大学博士论文 粘虫获得的转寄主粘虫颗粒体病毒PuGv．Ps的包涵体中含有分子量为108kD的增效 蛋自。PuGv-Ps经碱溶、SephadexG．200凝胶过滤层析分离获得部分纯化的增效蛋白。 以小菜蛾、甜菜夜蛾、棉铃虫等3种鳞翅目昆虫为试虫测定部分纯化的增效蛋白对Bt 的增效作用，联合作用的共毒系数在116．155之间，表明PuGV．Ps增效蛋白是一种增 效因子，可以增强Bt鳞翅目昆虫的毒力。 3探明了PuGv-Ps对Bt增效作用的影响因子PuGV-Ps对Bt的增效程度随 h 105．3至195．O之间，其中以Bt：PuGv-Ps为4：l增效作用最明显，72LC50为O．039 8。9)增效作用更显著。PuGV．Ps对Bt的增 显高于24℃～32℃，而碱性条件下(pH 效作用因小菜蛾龄期不同而变化，2、3龄幼虫试验，小菜蛾死亡率较Bt分别提高了 h 后接毒Bt，小菜蛾死亡率明显提高，48 亡率提高了53．87％，差异显著。 4分析了PuGV-Ps对苏云金杆菌6．内毒素的酶解活化作用用氨苯磺胺偶氮 7．38．10．38的碱性 酪蛋白为底物测定PuGv．Ps中总蛋白酶活力表明，PuGv．Ps在pH 条件下均具有一定的蛋白酶活性，且蛋白酶活力随pH的升高而显著提高。4种蛋白 用最强，表明Pu(Ⅳ．Ps的蛋白酶活性是以胰蛋白酶为主要活力的多种蛋白酶的活性 果表明，碱性条件下Bt晶体蛋白和PuGV-Ps共同孵育，130kD的6．内毒素被进一 lOkD、87妨、61kD、47 步酶解成分子量为1 kD等多种不同分子量的肽链，其酶 10．7的O．1mol 解活化程度随缓冲液p