细胞分裂素和生素对玉米叶序分化类型的调控研究.pdf

中文捅要 玉米是禾本科Zea属中仅有的一个gays种，其叶片为互牛，即每节着生一片叶， 在中部叶片的叶腋中可分别着牛一个果穗。根据植物分类学，禾本科植物一般没有对生 叶序，对生叶序玉米是一个新的变异类型，它的特征是茎秆同一节位上的叶片都是对生 的。它是一个极具研究价值的遗传资源。植物叶序发育的调控机理十分复杂，关于对生 叶序形成机制的研究报道甚少，本文以两组对生玉米、互牛玉米近等基因系为材料，采 用EIISA方法，比较对生玉米、互生玉米内源细胞分裂素和牛长素含量的差异，分析两 类内源激素对叶序的调控作用，在此基础上，通过在玉米组织培养过程中添加不同浓度 的外源激素，研究外源细胞分裂素和生长素对玉米叶序分化类型的调控作用，同时利用 PCR技术、RT-PCR技术，对玉米细胞分裂素合成的丰要相关调控基因进行分子分析，比 较对生叶序玉米、互生叶序玉米在细胞分裂素丰要相关调控基因结构和表达上的差异， 获得了如下主要结果： 1、利用植物激素ELISA方法测定和分析了不同叶序玉米的不同组织、不同生育期内源 量显著高于同期近等基因系的互生玉米，IAA含量在两者之间无显著差异；而不同 均无显著差异，对生叶序的形成与生长点组织细胞分裂素含量增加密切相关。另一 方面，三大类细胞分裂素含量在对牛叶序玉米中表现出相同变化趋势，这表明对生 叶序玉米的形成不是单一细胞分裂素合成基因的变异引起的，可能是细胞分裂素合 成的上游基因及调控基因或细胞分裂素运输基因的变异所致。 2、通过对两类内源激素含量进行分析发现，不同叶序玉米生长点CTK／IAA的域值呈现 出规律性的变化，对生叶序玉米幼苗顶端分生组织CTK／I从值均高于4．6，互生叶 比值不仅显著高于互生叶序，而且随互生到对生到螺旋畸形叶序逐渐增大，但不同 叶序玉米在不同生育期叶片、幼胚、成熟花粉中CTK／IAA均无显著差异，这表明玉 米生长点CTK／I从域值的稳定和变化是调节叶序稳定和变异的关键因素。 3、 12天的幼胚，分别在含不同浓度6一BA及不同浓度NAA的脱分化培养基上诱导愈伤 组织，筛选II型愈伤组织，分别转入不同浓度6-BA及不同浓度NAA的分化培养基 上诱导出芽，芽点出现开始，在解剖镜下剥离顶端分生组织，电镜扫描观察叶原基 生长素IAA、NAA含量。结果表明：外源细胞分裂素6一BA可调控瓦牛基因型玉米材 料幼苗叶原基转换为对生甚至畸形叶原基类型，6-BA浓度越高、处理越早，出现对 生叶原基、畸形叶原基的频率越高；外源生长素NAA可调控对牛基因型玉米材料幼 苗叶原基转换为．瓦生叶原基类型，NAA浓度越高、处理越早，出现互生的叶原基频 率越高。ELISA测定结果显示，不同叶序类型组培苗生长点两类激素含量的增加是 外源激素的吸收累积造成的，内源细胞分裂素及内源牛长素的含量并未明显改变。 4、通过对互生和对生基因型下外源激素诱导的不同叶序类型组培苗顶端分生组织两类 激素含量进行分析，结果显示：同类型的叶原基生长点CTK／AUX比值相同，在瓦生 基因型下，通过增加外源细胞分裂素6-BA、提高CTK／AUX可导致叶原基分化类型向 对生、畸形类型转换，在对生基因型下通过增加外源牛长素、降低CTK／AUX可导致 叶原基分化类型向互生类型转换，解除外源激素诱导压力，生长点CTK／AUX值的恢 复导致叶原基分化类型返回原始基因型类型，其CTK／AUX调节叶序转换的域值变化 与上述不同叶序类型玉米实牛苗生长点内源CTK／IAA域值变化具有相同趋势，这进 一步证实了生长点CTK／AUX是决定玉米叶原基分化类型的关键因素。 5、为了进一步了解对生叶序玉米生长点细胞分裂素含量的增加是否与其调控基因的变 序列，设计特异性上下游引物，通过对对生玉米及其近等基因系的瓦生玉米基因组 ZmRR5，ZmRR6， 而ZmRR6在茎尖中不表达，其对生玉米、互生玉米在不同时期、不同发育组织中 突变导致对生叶序玉米形成的结果不同。 综上所述，本文通过对对生叶序玉米与互牛叶序玉米不同组织内源细胞分裂素 和内源生长素的含量差异分析及体外两类激素诱导证实了对生叶序玉米的形成与 玉米生长点组织细胞分裂素含量的增加密切相关，激素平衡对玉米叶序分化具有重 要作用，生长点CTK／AUX值的稳定和变化是调控玉米叶序分化类型的关