黄瓜抗黑星病基ccu的精细定位与图位克隆及黄瓜与黑星菌互作的表达谱分析.pdfVIP

摘 要 黄瓜黑星病是黄瓜的主要病害之一，针对黄瓜抗黑星病基因的研究对明确黄瓜抗病机制和抗 病育种都具有重要的意义。 本研究以高感黑星病黄瓜材料9930(中国华北保护地栽培品种)、高抗黑星病材料91lOgt(欧 site 平NBS．encoding(Nucleotidebandingencoding)基因进行分析，对黄瓜抗黑星病基因进行遗 传、定位和克隆研究，并对黄瓜与黑星病菌的亲和与不亲和互作进行研究，获得如下研究成果： 60个，在基因组上的密度为20个／100Mb基因组，为拟南芥、水稻、杨树等平均密度的l／5，且 现象，LRR区域则高度保守。通过手工注释的方法发现三个黄瓜基因组中7个直系同源基因发生 了移码突变、1个基因发生提前终止密码子突变、1个基因缺失突变，说明不同黄瓜品种中抗病 基因差异大。 2、精细定位了黄瓜抗黑星病基因Ccu，发现Ccu区域存在一个紧密连锁的抗病基因簇。利 技术将Ccu定位到黄瓜2号染色体短臂末端一个长度为140kb的DNA区域，此区域包含一个紧 Csa006758)。通过比较基因组学发现该抗病簇与甜瓜、拟南芥、杨树等同源区域具有共线性(图 4-6、4．7)，表明此同源抗病基因簇由一个古老的抗病区域进化而来。 BAC文库，筛选出包含 3、图位克隆了Ccu候选基因。通过构建黄瓜抗黑星病品种91lOgt kb的亚克隆文库，筛选出包 目的抗病簇的BAC克隆H77．J7和H74．DI，进一步构建了长度为1l 含候选基因起始密码子上游到终止密码子下游各约2．5 Csa006757．1、Csa006758．1，可用于后续转基因验证其功能。 4、通过黄瓜与黑星菌亲和与不亲和互作的表达谱分析，揭示了黄瓜抗黑星病的机制。以黄 瓜高抗黑星病品种Gyl4和高感黑星病品种9930为试材，利用高通量的测序技术对接种病菌材料 及其对照材料进行表达谱分析，发现抗病品种在接种24小时后已全面上调了细胞内的2条HR Reaction)反应程序和l条PR(Pathogenesisrelated)基因相关的增强防御程序(图 (Hypersensitive 5．1l、表5．5)中的编码关键因子基因。与抗病材料相比，感病材料中只部分启动了第三条WRKY 转录因子参与的PR基因防御程序，其中WRKY转录因子表达水平显著上调，但其下游的PR基 因却没有上调表达，植物未进入对病害的防御状态(图5．11、表5．5)。 综上所述，本研究精细定位了黄瓜抗黑星病基因Ccu，并图位克隆了Ccu的候选基因，为黄 瓜抗黑星病分子育种奠定了基础；表达谱分析明确了黄瓜抗黑星病的抗病机制，为黄瓜抗病研究 提供了参考模式。 关键词：黄瓜，黑星病，黄瓜抗黑星病基因，精细定位，图位克隆 Abstract ofcucumber itis forUS a disease Scab，is worldwide，andmeaningful veryimportant tofurtherofthisdisease． study Cucumber inthe of‘‘9930’’，‘‘91 types 109t’’，‘‘Gyl4’’，‘Hardwickii’wereemployed isaNorthernchinafreshmarketthatis to 11 scab，9 present type susceptib