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噬菌体聚糖酶及其酶解产物的制各及性质研究 噬菌体聚糖酶及其酶解产物的制备及性质研究 摘要 本文从KlebsiellaK13及其专一性侵染噬菌体P13出发，对噬菌体P13的聚 糖酶进行制备，以此为工具对KlebsiellaK13的胞外多糖进行酶解得到酶解产物。 并对噬菌体聚糖酶及其酶解产物的性质进行研究。 为提高KlebsiellaK13胞外多糖产量，对其胞外多糖液体发酵的培养基组成 及培养条件进行了优化。通过单因素试验和正交试验得出最佳培养基组成及培养 条件如下：(1)最佳培养基组成为：10x盐溶液(g／L)：Na2HP04100，KH2P04 30，NaCl 2，CaCh．2H20 10： 10，MgS04．7H20 0．01，FeS04．7H200．01，K2S04 KI 以初始液体发酵培养基为对照，在上述优化培养条件下对Klebsiella 3进行液 体发酵，细菌胞外多糖的产量达6．7 g／L，比条件优化前的产量(2．64g／L)增加了 153％。 通过对噬菌体P13侵染过程中菌液浓度、效价及酶活测定，确定噬菌体聚糖 酶制备的最佳时间为噬菌体P13侵染后120rain。利用丙酮提取法对噬菌体聚糖 酶进行提取，并对最佳提取条件进行研究，发现添加1．5体积的预冷丙酮时提取 效果最好。沉淀所得噬菌体聚糖酶使用100kD超滤离心管进行超滤离心后，采 FF柱层析进行初步纯化。以提取和纯化过程中的酶活性及效价变 用Q．Sepharose 一化为指示，分析了每一个提取和纯化步骤的效果，发现经过这些过程，噬菌体聚 糖酶基本和杂蛋白分开。 以高度专一性侵染KlebsiellaK13的噬茵体所分泌的噬菌体聚糖酶为工具， 对Klebsiella K13胞外多糖进行降解，得到的酶解产物经Bio．GelP4凝胶柱及 Bio．Gel P6凝胶柱层析进行分离纯化，得到Pl，P2，P3三个低分子量的组分。 通过气相色谱分析对胞外多糖的单糖组分进行分析，发现此胞外多糖由葡萄糖、 甘露糖和半乳糖三种单糖组成。借助于ESI．CID．MS分析．确定了各寡糖组分的 分子量，并确定各片段分别为五糖、十糖、十五糖。经红外光潜分析，发现寡糖 噬菌体聚糖酶及其酶解产物的制各及性质研亢 含有糖醛酸等特征官能团。通过一维核磁共振波谱分析和二维核磁共振波谱分析， 初步确定了寡糖组分Pl的基本结构。 关键词：克雷伯氏菌；噬菌体；噬菌体聚糖酶：酶解产物 Ⅱ 噬菌体聚糖酶及其酶解产物的制备及性质研究 onand esofB PreparatiPropertiacteriophage—borne andIts GlycanaseHydrolysates Abstract Extracellular bacteriaisafavorablesourceforthe polysaccharide(EPS)of of with to preparationnew-typeoligosaccharidesspecial enzymes