原生质体融合构苹果酸高降解活性的葡萄酒酵母.pdfVIP

擒要 本研究以发酵性能优良的葡萄酒黪母和具有苹果酸高降解活性的裂殖酵母为亲 本，裁塌蔗生质传融合技零，{每建了警莱酸裹降鳃溺往豹蓑萄溅黪母；有效的提高了 稀萄酒酵母静降解苹采酸缱力，荠耪步研究了其生溪及发酵特僚。 研究了菌龄、酶解温度、酶解时间、酶浓度(戏酶系统)四因索对葡萄酒酵母和 裂殖酵母原生质体形成率和再生率的影响，采用菌龄、酶解温度、酶解时间、酶浓度、 稳渗骞g进行五嚣素四水平的正交试验，分辑各因素鹣缀差值，评挽各因素的影蛹程度。 结果表嘲：酶浓度(戏酶系统)静檄差值最高，其次为菌龄，酶浓度(或酶系统 为影响原生质体形成的主疆因素。葡萄酒酵母原生质体形成和再生的最佳条件是：菌 生凄接影藏拳为92，3％，褥生率为19．6％；裂蘩黪母藏生质体澎箴和再生的教建条 温度为28℃、稳渗剂选用KCl，原生质体形成率为94．6％，再生率为13．4％。 研究了葡萄酒酵母原生质体热处理时间和致死率的关系，得到了热处理时间对原 生爱落豹致残率蔻线，选撵为℃热灭活lO分势，戴瓣致夏率为100％。 研究了裂殖酵母原生硬体紫外线照射剂量和致死率的关系，襻到了紫乡}线对蔡生 质体的致孺率曲线，当紫外照射剂量为：紫外灯功率20W，照射距离30cm，照射时 间为5min时，原生质体的致死率恰为100％，选择该荆量为裂殖酵母原生质体紫外 灭活戆适霞剂篷。 双灭活二亲本原生质体后，进行琢生质体磁合，得出原生质体融台的适意条件为 基进行一级筛选，通过比较各菌株的颜色深浅来衡攮其降解苹果酸能力的强弱，从平 羧上薅选出了蘩落颜色鞍深瓣36臻蘸邂行二级薅逡。 以葡萄汁为培养基采糟柱氏小管教释法进行二缀筛选，发酵融闻48h，戳产气速 度和杜氏管产气量为指标，进行发酵力的筛选。 对二级筛选所得到的融合子进行细胞体积、DNA含量方面的鉴定分析，结果显 示多拣融合予缨戆钵积翻鬟大予嚣亲拣各自俸积，DNA含量约梵二亲撩之秘，证实 确为融合予。 采用毛细管电泳法，对二级筛选褥到的9株融合子进行三级筛选，精确测定其苹 果酸降解程度；从中筛选出～株苹果酸降酸率达到31+7％且发酵速度较快的菌株。出 发蓥探蘧蘩溪簿母熬葶鬃簸降瑟率为1．3％，融合爱戆蓥拣较崮发蘧拣苹暴酸癸簿率 提高30．4％，该菌株编号为Z29。 采用连续传代的方法研究了Z29融合子的遗传稳定性，结果表明：连续传代15 次后，Z29融台子的苹果酸降解率、发酵性能与初代融合子相比无明显变化。 对Z29融合子絮凝搜及毳重S02缝貔逶牙了测定，结果表臻，茭絮凝性强，瓣S02 性毹好，怒…株良好的工渡用葡萄酒酵母。 在感观评价上，融合予发酵的赤陵珠葡萄酒优于亲本解苹果酸裂殖酵母M，所发 酵的酒，与潦本葡萄酒酵母c，所发酵的葡萄酒相通：口感丰满协调，清爽柔和，无 酸涩感，酒味突出。表明融合子Z29继承了亲本的优良性状，是一株优良的葡萄酒酵 母。 对Z29菌株的生长和发酵特性进行了研究，分别测定了Z29菌株生长和发酵的最 接种量对生长曲线和发酵曲线的影响。结果表明：接种量对生长曲线影响很明显，接 种量越大，达到稳定期的时间越短。但是最终生物量并不受接种量的影响。对于发酵 曲线，接种量对发酵力影响不明显。在发酵温度范围内，温度对发酵曲线的影响较明 显，温度为28℃时，发酵力达到最大。 关键词：葡萄酒酵母，解苹果酸裂殖酵母，融合，苹果酸，毛细管电泳 StudiesontheConstructionofYeastwith malicacid by high degradationProtoplast fusion Major：FoodMicrobiology Wei Advistor：Zhang Graduatestudent：Shi Don百ian Abstract This iSfocused