三唑磷酶联免疫析方法及试剂盒的研究.pdf

中文摘要 硫代磷酸胺(THHe)基础之上，分别与BSA偶联获得免疫原，结合比分别为166：1和8．2：1， 经免疫兔子得到两种抗三唑磷多克隆抗体(抗THBu抗体、抗TnHe抗体)，相应冻干粉的 56×10’。 效价分别为512×105和2 通过比较不同的ELISA方法，选用了包被抗体直接竞争ELISA分析方法，包被抗THBu 抗体与三唑磷或酶标半抗原HRP．THHe竞争反应。对固相载体、包被缓冲液、盐离子浓度、 甲醇浓度、包被温度、时间、减少非特异性吸附的方法等因素的筛选试验比较，优化了酶 4O．01M 联免疫分析的方法和条件。优化后结果显示：用美国CoStar板，pH7PBS稀释包被 抗体，在37。C下包被2h效果最佳；反应介质加入2％牛奶可减少非特异性吸附，提高检测 灵敏度；盐离子浓度o02M，甲醇含量5％有利于抗原抗体竞争反应。利用优化后的分析条 件，用直接竞争ELISA方法进行了抗体亲和性和特异性研究。结果表明，抗THBu抗体对 三唑磷有较高的亲和性，三唑磷与抗体在1．95-1000ng／mL浓度范围内，抑制率与浓度呈线 性关系，线性回归方程为y=1262