小麦dreb转因子与冷激蛋白基因功能鉴定.pdfVIP

摘 要 干旱、高盐和低温等非生物胁迫是影响植物生长发育的主要限制因子，造成我国 农业生产减产的主要因素。植物在长期进化过程中，形成了一套严密而复杂的分子机 制以减少或避免胁迫环境带来的危害。近些年，对植物的抗逆机制研究取得了一定进 展，通过分子生物学手段进行作物抗逆育种也越来越被研究者重视。转录因子在调节 植物生长发育、植物逆境信号传递和相关功能基因表达中起到重要作用。 DREB 转录因子能够与 DRE/CRT 顺式作用元件发生特异性结合，激活抗逆相关基 因的表达，提高植物的抗逆性。本实验进行了 DREB 转录因子表达特异性分析和互作 候选蛋白的筛选以及冷激蛋白基因的功能分析。 1. DREB 转录因子的表达分析。经过 ABA、高盐和干旱胁迫处理的小麦幼苗提取 RNA，反转录合成 cDNA，应用实时定量PCR 技术对 DREB2 和 DREB9 转录因子基因进行 表达特性分析。结果表明：DREB2 和 DREB9 基因在各种胁迫条件下的响应程度和响应 时间不同，并且DREB2 和DREB9 基因在ABA、干旱和高盐胁迫下的响应强烈，因此DREB2 和 DREB9 基因在 ABA、干旱和高盐非生物胁迫应答反应中起到重要作用。 2. TaDREB6 基因互作蛋白的筛选。研究证实 TaDREB6 基因在干旱胁迫应答反应过 程中起调控作用。本研究构建了小白麦 cDNA 文库，以 TaDREB6 为诱饵，利用酵母双 杂交技术从小白麦 cDNA 文库中筛选 TaDREB6 互作蛋白，对筛选到的候选阳性克隆进 行测序和比对分析，获得与能量代谢、抗逆和防御、转运、转录和翻译、信号转导以 及生长发育等相关的候选蛋白，为进一步研究 DREB 介导的小麦抗逆机制提供了基础。 3. 转 W18 基因小麦的获得和冷激蛋白基因 XuA 和 XuB 的功能鉴定。构建转小麦表 达载体，利用基因枪法把 W18 基因转入小麦，对 T 和 T 代植株进行了阳性检测。共 0 1 获得 128株 T 代植株，含有目的基因的阳性株为 12株，含有 Bar 基因的阳性株为 12 0 株。获得 120 株 T 代植株，含有目的基因的阳性植株为 51 株，含有 Bar 基因的阳性 1 植株是 43 株。构建 XuA 和 XuB 基因转拟南芥表达载体，通过热激转化法将连到载体 上的 XuA 和 XuB 基因转入农杆菌 C58C1，利用花序侵染法浸染拟南芥，收获拟南芥种 子，在含卡那抗生素 MS 培养基上筛选。筛选到 T 代，对转基因拟南芥进行高盐和低 3 温胁迫抗性分析。结果表明：XuA 和 XuB 基因的表达提高了转基因拟南芥对高盐和低 温的抗性。 关键词：小麦；DREB；实时定量PCR；酵母双杂交；转基因 Functional Identification of DREB Transcription Factor and Cold Shock Protein Gene in Wheat Abstract Abiotic stress, such as drought, salinity and low temperature, is the main cause of agriculture production reducing in our country，seriously affect the plants growth and development. In the long-term evolutionary process ，plants formed a set of strict and complex molecular mechanism to reduce or avoid the damage form stress. In recent years, the researcher have the progress