小麦及其近缘植npr1类似基因和反转录转座子基因片段的分离和特性分析.pdfVIP

以白粉病菌诱导10小时到24小时表达量最高。在小麦纹枯病菌(R^洳crM蛔cPW口胁)诱导 情况下．n^懈j基因表达量也增加，纹枯病菌诱导5小时7iⅣ日j表达水平最高，然后表达量义 降低，这些结果说明：舢，介导对白粉病、纹枯病的抗性调控反府，7w胃，的表达模式有 所不同。 4． 为了解n^懈j在中间偃麦草基因组中的存在形式，以乃^甜J为探针与D口rj，口口ⅢHI限制内 切酶消化的中间偃麦草基闪组DNA进行soumern杂交分析。结果表明：乃ⅣⅣ，以单拷贝的 形式存在于中间偃麦草基因组中。 5， 利用瞬间表达技术初步分析了册妤，j基冈的功能：首先构建了7wⅣ，基冈的高效表达载体， 然后使用基因枪将乃nwf基因和GC毽基因的载体共轰击导入到感向粉病小麦品种中860l离 h后观 体叶片表皮细胞中，用G吣基因标记阳性转化细胞。转化后4h接种向粉菌孢子．44 察转化阳性表皮细胞，研究n^wf基因表达对白粉菌入侵及吸器形成产生的影响。结果表明， 7hⅣH，在中8601叶片表皮细胞中能够瞬间表达，对白粉病菌的侵入和吸器形成均有部分抑制 作用，在一定程度上增强了对白粉菌的抗性。 6． 本研究探讨了小麦反转录转座子的活化模式，发现sA、JA和小麦白粉病菌防御相关的胁迫 可以激活小麦反转录转座子。利用接种自粉病菌的抗病易位系小麦Pm97034的总RNA．通 过RT-PcR扩增．克隆了5l反转录转鹰子的反转录酶片段，发现3个新的小麦反转录转_唪子 家族famiIy 4反转录 4中随意选择尺”o作为探 转座子具有活性。为了明确famiJy4是否具有转录活性，从family 针，与用防御相关胁迫如JA、sA和病原菌处理过的Pm97034的总RNA杂交。结果表明， RT20在正常情况下有低水平的表达，但在JA、sA和病原菌诱导r，表达水平明显增强，24h 处理后达到高峰，48 h后恢复到正常的水平。说明famiIy4的反转录转座子具有转录活性。 southem分析结果表明昱0以高拷贝的形式存在于小麦及其近缘属基冈组中。表明了这种转 录激活方式可能是小麦反转录转座子家族的共同特征。 综合上述，本研究从自粉病菌诱导的小麦及其近缘植物中分离克隆山的M噌』类似基阅币l 小麦反转录转座子保守片段，并对它们的生物学特性和功能进行了分析。7WH』在一定释度上 增强了表达细胞对白粉病菌的抗性。从小麦及其近缘属中克隆的ⅣP尺，类似基因对揭示抗病作 用机制和进行抗白粉病、纹枯病广谱抗病育种具有重要意义：具有活性的反转录转座子可为基 因标签法分离基因和功能分析提供一个有力的工具。 关键词：中间偃麦草：粗山羊草：小麦；小麦向粉病菌；小麦纹枯病菌；ⅣP月，类似基闪^w， 调控反麻：瞬间表达系统；增强抗性：反转录转庸子：转录 R resistance 抗性 SA acid salicylic 水杨酸 SAR resistance systemicacquired 系统获得性抗性 sid SAinduction．deficient sA诱导缺陷 sjd ofSA sA不敏感的抑制子 suppressorinsensjtiV．ty SNIj induc-ble1 suppressorofnprl—l npr卜1诱导抑