二化螟bt毒素体蛋白—氨肽酶n和钙粘蛋白基因的克隆及在昆虫细胞系的表达.pdf

摘 要 二化螟c^砌suppressalisOValk口)是严重威胁我国水稻生产的重要害虫。近年来，受耕作制 度和种植结构的改变，高产优质水稻品种的大面积种植、天气等原因的影响，二化螟的发生逐年 加重，而且由子化学农药长期大量反复的使用，使其抗药性明显上升，更加难咀防治。转BI基 因水稻的出现为防治二化螟提供了新的有效的方法，但是从生物学角度来看，昆虫对转基因作物 产生抗性是一种胁迫进化现象。因此，研究Bt毒杀二化螟的机理、二化螟对Bt产生抗性的可能 机制．可以为将来转基因水稻的推广、制定抗性治理策略、延眭转基因水稻的使用期限等提供重 蛋白基囡的全长序列，并在昆虫杆状病毒表达系统中成功的进行了表达．主要结果如下； 利用PCR结合RACE技术的方法得到了二化螟中肠氨基氨肽酶N基囡的全长序列，同时利 用PCR技术得到钙粘蛋白基因的全长序列。其中APN经数据库比对鉴定为氢肽酶N基因家族的 编码1075个氨基酸，其C端有一段25个氨墓酸组成的片段，具有亲脂性和跨膜特性；钙粘蛋白 16个钙粘蛋白重复域．与欧洲玉米螟等其他鳞翅目昆虫钙粘蛋白具有较高的同源性，同源性达 73％。 昆虫杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一，已广泛应用于重绢蛋白的表达。该系统具有 许多优点，如多角体启动子控