桃果实发育硬核蛋白质双向电泳方法的建立及应用.pdfVIP

摘要 蛋白质是生命功能的执行体，蛋白质组学是研究细胞、组织或生物体中蛋白 质组成及其变化规律的科学。双向电泳作为蛋白质组研究的三大核心技术之一， 是目前常用的唯一一种能够连续在一块胶上分离数千种蛋白质的方法，广泛应用 于生物学研究的各个方面。随着桃果实表达序列标签的完善，桃果实发育的功能 基因组学研究迎来了新的机遇。本实验以“久保”桃(胁删s∥憎f∞ L“．Okub∞)中果皮为试材，通过比较不同上样量、不同上样缓冲液、不同胶 条平衡缓冲液、不同pH范围固相pH梯度(i姗obilizedpHgradients，口G)胶 条、不同染色方式等因素对双向电泳图谱效果的影响，试图建立一套适用于桃果 实蛋白质组学分析的双向电泳方法。实验结果表明采用17cm的mG胶条，90¨g 蛋白上样量，样品干粉溶于375此含有尿素、硫脲、CHAPS、磺基三甲基胺乙 内脂10、两性电解质等成分的水化上样缓冲液中，等电聚焦后用含有磷酸三丁 酯的胶条平衡缓冲液一步平衡，进行十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，考马 斯亮蓝染色后的电泳图谱效果较好，但银染色得出的双向电泳图含有更多的蛋白 cm 5．肚8．O的17 质点，且背景清晰，适用于桃果实蛋白质组分析。继而采用pH DG胶条并应用以上方法对桃果实发育过程中硬核期的中果皮和内果皮进行蛋 白质双向电泳分析，发现中果皮双向电泳图谱含有蛋白质点1318士125个，内果 皮双向电泳图谱含有蛋白质点1415士133个，两张图谱相比较至少存在24．77％的 差异，随后的蛋白质鉴定将利用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱来完 成。 关键词：桃，蛋白质，双向电泳，蛋白质组 Abstract ill are isa Mostactivities cells byproteins．Proteomicssubject living pcrfo瑚ed to the ofall the in柚 by geIlome studycompositioIls锄dchaIlgcsproteinscxpressed ofthethree one orgaIlism．As significant isane)【clusiVe to aIld elcctrophoresis) techniques印aratecontinuouslydisplay thous锄dsofst锄dard inone hasbeerl usedineVeryaspect proteill gel，which widely atthe withthe tags)were ofbiology EST(expfessedsequeIlce presenttim．Along ob协ined丘Dmf．mi协atdif弛rcIlt of genomics peach developmentalstages，fIlnctional becon疗0ntedwitllanew peach觚it晰11