植酸酶基因转化花及转基因植株再生.pdfVIP

摘要 本研究采用基因枪轰击转化技术，将外源植酸酶基因(P丘删)导入棉花茎尖分生组 织，初步获得转基因植株；利用根癌农杆菌转化法将植酸酶基因导入棉花胚性愈伤组 织，探讨农杆菌侵染棉花胚性愈伤的转化条件，并获得抗性胚性愈伤组织；通过花粉 管通道法将P矗州基因导入棉花，获得经PcR检测的转基因植株。本研究旨在为棉花 现代分子育种增添新的内容和新的种质材料，同时为解决农作物有效利用土壤有机磷 资源开辟一条经济有效的途径。 利用棉花茎尖分生组织易于再生的特点，将含有植酸酶基因妒^州)的质粒包裹在 金粉上，轰击转化陆地棉品种农大KBl8的茎尖分生组织。摸索出了～条适合茎尖再 生的途径。对轰击参数进行了综合比较，优选出最佳轰击组合，确定了适合基因枪茎 尖转化体系的梯度筛选法。研究认为，培养茎尖的培养基以MsB附加30％葡萄糖， 不添加或添加少量激素为佳；基因枪轰击过程中，采用轰击压力1350psi，真空度 28inch Hg，轰击距离9cm，轰击1次，转化效果最佳；轰击后接入加有19·L“活性炭 的MsB培养基中恢复培养4．7d，至组织长出绿芽点时，将其转入筛选培养基 MSB+Kall(70、80、100、1 进一步证实了尸矗州基因在转基因棉花基因组中的整合。从基因枪轰击到获得转化小 植株大约需要3个月时间，最终转化率为2．97％。 可直接用于遗传转化的农杆菌工程菌株。为了建立农杆菌介导的棉花转基因技术体 系，用获得的农杆菌菌株侵染棉花胚性愈伤组织，摸索了影响其转化的因素。结果表 明：不同棉花品种间胚性愈伤组织的生长动态和对卡那霉素的敏感性有很大差异；农 杆菌侵染时间在5．10分钟、共培养时在18．21℃条件下培养1—2d，转化效果较好，通 过卡那霉素筛选培养，获得抗性愈伤组织。对获得的愈伤组织进行PcR检测，初步 证明尸矗州基因己转入棉花基因组中。 转化成铃的种子种植予温室，待其长出1片真叶时，用浓度为2000mg·L_l的卡那霉素 因。 关键词：棉花；遗传转化；植酸酶基因；转化植株 GeneticTransformationGeneaⅡd of offj嚏}妇sP Regeneration PIantsinConon Transgenic Author：Lj Qiuling Gen“icsand Major：crop Breeding Ma Supervisor：ProfZhiying Pmf WallgXingfen Abstract Intllis cotton witha wereobtained study，some缸_ansgenic plants p砂衄她gene Via bombardmentof nleristems．A 锄ountof successfully panical apical la唱e calluswas obtained method． kan锄ycin·resistalltembryogenic via爿grD6日cferf甜珊一mediated PCR showe