水稻半胱氨酸蛋酶抑制剂基因转化甘蓝的研究.pdfVIP

摘 要 本研究怒利用植物基裰工程获碍甘簸撬虫材料的礤究的一部分，主要工 作和结条魏下： I． 抗虫蒸因水稻半胱氯酸蛋白酶抑制剂基因及其植物表达载体的构 建e， ，逶逶一系臻克篷籍承鞭半魏氨酸蟹酝薅捧裁裁鍪霾转耽至蔟粒pBll21 子，并与具有Kan抗性的NPT．1i基因相连，构建成具有卡那霉素抗性的植 以进行甘蓝的遗传转化。卜一～、厂一 2．甘蓝搿频再生体系黔建寺‘． f以4-6天曾蓝韵子时，下趣：转和25天菌龄甘蓝无菌荐生萤静时片为岁|、 植体，MS为赫本培养基．通过加入不同浓度和不同组合的6-BA，ZT．NAA， 筛选了步}植体不定芽分化的最适培养基(MA+6．BA3．0 mg-I．})、并比较了三 耪葑檀俸熬分纯旋力。其中，下疆耄蠢戆分伍频率最褰、产芽鼗最多，”}菏次 之，子叶再次之：P—、y” 3．甘蓝外植体高频转化体系的建立． 基最逶壤券基上试验了彗蓝争}}壹体对专餮霉素豹瓣受爱力，绶培葵嚣 闽、共培养封于嗣、浸菌对问等转化条件，建立了甘蕊高频转化体系：4—6天 甘蓝的子叶和下胚轴外植体和25天苗龄忖蓝无菌苗叶片外植体在褥生培养 蒺上预培养2灭，共培养4灭至啤口处可照徽小的蘑落黠，立露转入会Carb 豹脱菌培养鏊(MS+6一BA3．0 500 mg’|．1+AgN034．0rrcr2+Carbrag．1’)中磐养7 天抑制农杆菌的生长，之后在含Kan5 mg·l。的筛选培养基筛选抗憾愈伤组 缓和抗性芽，德2周更换一次培养基。聂蓠后，外植体再生频率大大下降， 在渚莽基中鸯嚣入4mg·i。鹃AgN03有剩子岁}{耋薅霉圭鞭率戆鬟高。共壤莽期 间，用透气的封口膜代替parafilm膜，可提高井植体抗性愈伤组织的产生 频率。用高浓度的Kan避行筛选不能得到抗性愈伤组织和抗性芽，故采用 低浓度数Kan送{亍簿选，经多凌继戴簿滚，海汰未转亿麴“送麓舔”，获簿 薅有kan抗性的再生茁。h 4．转基因甘蓝的鉴定。 soutl瀛blot分析，结果显示大部分转基因植株呈阳性，表明目的基因已整 合到甘蓝染色体上，但也存在少数假阳性，为未转基因苗。由此证实：水稻 半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因已整合到甘蓝基因组?：j》7、一一一 关键词：水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因，甘蓝，转化，抗虫 of ProteinaseInhibitor onTransformationRice Study Cysteine into oleracea Cabbage(Brassica (Oryzacystatin)Gene vat．capitataL．) Abstract tocruciferaceaeBrassieaL。whichisamajor Cabbagebelongs genus inChina．Itisattacked of by seriously vegetablecrop pestsLepidopteraduring chemicalinsecticidecouldreducelossesin growing production， Season。Although