水稻抗苯达松和酰脲类除草剂基因的分离与克隆.pdfVIP

摘要 科用Y一射线诱变技术，中国科学家张集文研究员和日本学者MoriK先后分 别从光／温敏籼稻不育系W6154S和粳稻常规种农林8号的突变后代中获得了苯达 松敏感致死材料8077S和农林8号I．利用该致死突变位点标记光／温敏籼稻不 育系或一般质不育系，在苗期通过喷施一定浓度的苯达松溶液，可以去除不育系 自交种子，保证杂交制种纯度。过去的研究表明，两个敏感突变体均受一对隐性 基因基因控制，分别被命名为bel和bsl，利用SSR标记同时被定位在第三染色 体上，分别距离SSR标记RMl68为7．1cM和SSR标记RM3856为14．IcM。 本研究在前期的研究基础上，对敏感致死位点进行了精细定位，通过基因互 补和反义抑制，最终分离克隆了该基因。同时，利用RT—PCR技术，分析了该基 因的表达特性。获得的主要研究结果如下： 一 1．敏感性实验表明，8077S和农林8号M对lOOmg／L的苯达松就具有一定敏感 性，两者的敏感性均比相应野生型的敏感性要低60倍左右；同时，农林8 号M又比8077S要更敏感： 2．等位性实验表明，来自两个不同突变体的突变位点互相等位； 3．利用SSR标记将致死位点精细定位在SSR标记3a和7a之间，其遗传距离分 共分离； 4．生物信息学分析表明，该致死位点可能与细胞色素P450基因有关，并确定了 四个P450基因为候选基因。进一步对四个候选基因进行测序比较分析表明， 其中一个P450基因，即CYP81A6基因，在8077S和农林8号M中，由于该基 因在不同的外显子上出现了单碱基缺失，造成基因翻译的移码突变，致使该 基因的功能尚失； 5．将该基因全片段(含启动子、基因编码序列和终止子)导入突变体8077S中， 转化后代恢复了对苯达松和磺酰脲类除草剂的抗性； ． 6．而将该基因的反义片段导入野生型W6154S中，则使转化后代对苯达松和磺酰 脲类除草剂敏感致死。 关键词：水稻；苯达松；bel；CYP81A6．图位克隆 Abstract BenhazDn—lethaland mutants8077SandNorin8Mobtained sulfonylurea-sensitive from treated malesterile y-ray W6154S，aphotoperiod-andtemperature-sensitive ofindicadeeand inbredline rice Chinese (PTGMS)line Norin8，811 ofjaponicaby scientistJiwen andK acritical in rice Zhang Meri,respectively,haveusagehybrid mutantsto seed these sterilelines PTGMSandCMS production．Using tag including linescan fromcontaminationofself-sew．AsfromsterileIines preventhybrid辩副s bentazonherbicidesat done themselves studies byspraying seedlingstage．Previous bvdifrerentresearchersshowedthatthesetwomutantswer