玉米核糖体失活白基因z108在大肠杆菌中的表达及在烟草和番茄的转化研究.pdfVIP

摘 要 核糖体失活蛋白(Ribosome．inactivating rRNA 3’端茎环结构 泛存在的毒蛋白，具有RNAN．糖苷酶活性，可特异地水解掉28S 的一个腺甘酸，阻止核糖体与延伸因子EF．Tu和EF．G的结合及多肽链的延伸，从而抑 雠靶细胞中蛋白质的合成。 研究表明，RIP具有广谱的抗病毒作用，它可以使病毒的核糖体失活，能有效阻 止病毒侵染，已被广泛用于抗病毒基因工程研究，目前，已有50多种植物中的60 多种不同的核糖体失活蛋白基因被分离、克隆出来，并在烟草、番茄、马铃薯和水稻 等植物中表达，获得抗病毒转基因植株。 根据核糖体失活蛋白的分子结构，可将其分为I型和ll型两大类。玉米核糖体失 活蛋白是一种在玉米胚乳中特异表达的双链I型RjP，它首先以无活性的单链li{『体形 式b．32在种子内大量合成，种子萌发时，内源蛋白酶通过酶解作用，除去前体蛋白 b．32结构中的N、C末端以及中间部位的氨基酸序列。目前有关玉米核糖体失活蛋白 的功能和作用机制仍不清楚。 为进行抗病毒基因工程及玉米核糖体失活蛋白抗病机制研究，本实验室从玉米 (Zea Mays esculentum (Nico“ana．tobaccum．L)K326和番hfi(Lycopersicon esculentum fLycopersicon 实的基础。其研究结果如下： 这是国内首次在原核生物体中表达玉米核糖体失活蛋白基因及其编码蛋白。 pCambial301在樱红和97—4上的转化率为23．08％，35．82％。 植株进行PCR扩增，结果表明，5个转化体中均有插入基因序列的表达，这表明，经 过潮霉素筛选的转化体植株均含有目标基因的插入。 4)通过组织染色的方法对于表达基因迸行Gus基因表达的检测，可以观察到， 异性。 关键词： 玉米核糖体失活蛋白 基因转化 烟草 番茄 ABSTRACT a classoftoxic in Ribosome—inactivatingproteins(RIPs)isunique protein actsas toremovea species，which adenineresiduefromthe285 N—glucosidases specific oftheribosomewithextensionfactor rRNA，block EF—TuandEF—G binding prevent extension inhibit inthecells． ofpolypeptide，therebypotentlyproteinsynthesis evidencesthatRIPscanbeusedinvirus—resistant Manyexperimentalproved gene forits viral ribosomeand theinfectionof engineeringinactivating