烟草青枯病抗性传分析及qtl定位研究.pdfVIP

A Dissertation for the Degree of Science Doctor Genetic Analysis and QTL Detection of bacterial wilt resistance in tobacco (N. tabacum L.) Submitted to Anhui Agricultural University In partial fulfillment of the requirement for the degree of Doctor of Science Written by Qian Yiliang Supervised by Prof. Yao Danian Anhui Agricultural University Hefei, Anhui, China May 10, 2013 摘要 烟草青枯病是一种由青枯菌( Ralstonia solanacearum) 引起的细菌性病害，是典 型的维管束病害，显著的病状是枯萎，一旦发病即可造成全株死亡，严重影响烟草的 产量和质量，是一种毁灭性病害。本论文在对安徽省宣州区的寒亭、文昌、黄渡、杨 林，以及芜湖县三元镇的青枯病病菌分离鉴定的基础上，研究了安徽省烟草青枯病病 菌对烟草的致病力及与相关生物学性状的关系，开展了抗青枯病基因RRS1 的烟草同 源性筛选研究，利用 15 个亲本配置的双列杂交组合进行了烟草青枯病抗性种质的主 微位点组效应和配合力分析，利用 BSA 集团分离分析方法对 2 个烟草 F2 随机群体 （TI448A×Enshu 和TI448A×岩烟 97 ）进行了烟草青枯病抗性的QTL 定位分析。主 要研究结果如下： 1、烟草青枯病病原菌的分离检测及致病力分化研究 采用组织分离法获得青枯病菌株8 个。对其中5 个进行了较详细研究，分别为： RS1 、RS2 、RS06 、RS07 、RS08 。从菌株的致病性来看，RS23 、RS07 、RS71 的致病 性较强，对烟株叶片进行注射接种，叶片均有不同程度发病，但发病程度没有灌根法 严重；供试菌株用注射和灌根对烟株均有致病性。同时针对烟草青枯菌生化型测定分 析研究结果显示，分离的菌株除 RS3 不能利用卫茅醇外，其余都能利用三糖三醇； 同时也均能利用硝酸盐，发生还原反应。根据青枯雷尔氏菌生化型划分标准，确定了 从皖南烟区分离的菌株为生化型Ⅲ型。分析表明，不同菌株利用糖、醇的能力存在部 分差异， RS23 利用纤维二糖、卫茅醇的能力均较弱，RS22 对卫茅醇利用能力也弱， 但对其它糖、醇能完全利用，也能使硝酸盐还原，因此也属于生化型Ⅲ；RS3 不能利 用卫茅醇，但能利用其它双糖、双醇和还原硝酸盐，这个菌株划为生化型Ⅲ－1。 2 、青枯病抗性基因RRS1 的烟草同源性研究 研究针对烟草青枯病的田间单棵发病统计，病情等级，大田发病面积，进行重复 性，多层次，多样本的人工统计，在拟南芥青枯病抗性基因RRS1 的同源性检测试验 中共筛选出3 个烟草种质（G28，K346 ，LMAFC34 ）含有RRS1 特异性扩增序列，针 对筛选出3 个烟草种质(G28、K346 、LMAFC34)含有RRS1 特异性扩增序列片段进行 多重复的特异扩增纯化，增强结果的可靠性和完整性。由于RRS1 基因含有有4 个内 含子，所以在引物设计上需要进一步加密，保证准确的特异性扩增，研究可以选用另 外一种分子标记进行辅助和验证检测，能提高试验结果的准确性。 3 、烟草青枯病抗性的主微位点组遗传分析 主-微位点组联合分析研究了青枯病病率和病指在始病期后第5天、第15天和第25 天的效应值，主位点组效应均达到显著，而微位点组效应未达到显著。其中J1=13056