基因工程第四章创新.ppt

本章目标 掌握：基因工程常用技术的原理与方法 1. DNA提取 2. 琼脂糖凝胶电泳技术 3.杂交技术 4. DNA序列测定技术 5. PCR技术 重点：PCR技术、琼脂糖凝胶电泳、Sanger 双脱氧链终止法测序的原理及过程。 难点： Sanger双脱氧链终止法测序的原理 作业：P95 1、3、6、7、8、11、12 * [医]Har GobindKhorana,印度出生的美国化学家，1922年生，因发现在遗传情况下酶对细胞功能所起决定作用的过程而与Robert William Holley和Marshall Warren Nirenberg共获1968年诺贝尔医学生理学奖； [人名] 霍拉纳 * 同义引物（Sense），反义引物(anti-sense)， * 随机引物为一组6个核苷酸随机组成的寡聚物,几乎包含所有6核苷酸的序列。 （1）制备单链DNA模板 2. 技术要点 就是待测序的 DNA链。 ①不能有5’?3’和3’?5’的外切酶活性； ②与模板的亲和力高，不会提前脱离模板。 （3）特殊的DNA多聚酶 dNTP / ddNTP = 100 / 1 （4）制备2’和3’双脱氧的ddNTP 时, DNA电泳带谱的分离效果最好，可读出200多个核苷