马铃薯悬浮细胞的建立及小g蛋白atrop1,strac1的亚细胞定位.pdfVIP

摘 要 植物细胞悬浮培养是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里培养单细胞及 小细胞团的培养系统，是植物生物技术中最有用的研究手段之一。小 蛋白是一类 G 单体 结合蛋白，具有 活性，植物细胞内的小 蛋白家族统称为 GTP GTPase G ROPs （ ），大量的研究结果已经证明 酶在植物防 Rho-related GTPase from plant ROP-GTP 卫反应体系的建成过程中具有十分重要的调控作用。本研究主要利用马铃薯品种底 西瑞建立适于遗传转化的马铃薯悬浮细胞体系，将拟南芥 AtRop1 及马铃薯 StRac1 的野生型，激活型和非激活型分别与绿色荧光蛋白（ ）融合，用农杆菌介导的 GFP 瞬时转化和PEG （聚乙二醇）介导的脂质转化方法，转化烟草叶片和马铃薯悬浮细 胞，利用荧光显微镜观察 的位置进而确定小 蛋白的亚细胞定位。研究结果表 GFP G 明： 马铃薯品种底西瑞（ ）悬浮细胞生长呈典型的 型，生长周期为 周左右。 1. Desiree S 2 添加 及 的 培养基最适合底西瑞悬浮细胞的生长。细胞 2 mg/L 2,4-D 1mg/L NAA MS 的最佳接种量为7.5mL/50mL 。 利用农杆菌瞬时表达的方法，将拟南芥中的小 蛋白 定位在烟草叶片表 2. G AtRop1 皮细胞的细胞膜上，激活型的At CA-Rop1 和失活型的AtDN-Rop1 分别定位在细胞膜 和细胞质中；马铃薯小 蛋白 和其激活型的 定位在烟草叶片表皮 G StRac1 StCA-Rac1 细胞的细胞膜上，而失活型的StDN-Rac1 主要表达在细胞质和细胞核中。 利用 法转化马铃薯悬浮细胞，拟南芥小 蛋白 定位在细胞膜上， 3. PEG G AtRop1 激活型的At CA-Rop1 和失活型的AtDN-Rop1 分别定位在细胞膜和细胞质中；马铃 薯小 蛋白 ，和其激活型的 定位在悬浮细胞的细胞膜上，而失活 G StRac1 StCA-Rac1 型的StDN-Rac1 主要表达在细胞质和细胞核中。 关键词：马铃薯；悬浮细胞；小G 蛋白；亚细胞定位 The Establishment of Potato Suspension Cell Lines and the Subcellular Localization of Small GTPases AtRop1, StRac1 Abstract The suspension cell culture is one of the most useful methods to get single cell or small cell grou