口腔生物学实验教程摘要.pptVIP

实验方法： 1. 分离破骨细胞 取新出生的白兔5只用肥皂水洗涤三次→清水冲净→断头处死→浸泡于75%乙醇中1分钟→去皮分离股骨、肱骨、胫骨和颅盖骨→置盛有60ml Hanks液的培养皿 →刮除软组织及软骨骺→置Hanks液洗2次→移入12ml含有抗生素的199培养液 纵行剖开骨→以手术刀轻刮骨的内表面→用尖吸管反复吸取培养液冲洗骨髓腔内表面至色发白为止→静置1分钟，取悬液备用。 主要实验设备与器材： 第四节 骨组织生物学和口腔细胞培养 2. 骨片制备 将放至-70?C冰箱中储存的牛股骨取出，在冲水降温的条件下分切成6mm ×6mm×0.2mm大小的骨片，并用不同粗细的砂纸磨成10μm厚。 将骨片置生理盐水中于超声波清洗器上处理5分钟×3次。 将超声处理后的骨片浸入含抗生素的199培养液中浸泡5分钟～10分钟×3 次。 3. 破骨细胞培养 取24孔板，孔内分别放入骨片和盖玻片，并分别加入1ml199培养液，置5%CO2培养箱中恒温预热1小时。 每孔加入0.5ml上述制备的细胞悬液，培养15小时～20小时后，吸去悬液，用199培养液冲洗未贴壁的细胞，继续培养并观察骨片被吸收的情况，根据细胞生长、骨片吸收情况和实验需要，决定培养终止时间。 4. 破骨细胞鉴定 用倒置相差显微镜或电镜观察；酸性磷酸酶或降钙素染色后鉴定。 第四节 骨组织生物学和口腔细胞培养 4. 破骨细胞鉴定