不同倍性泥鳅鳍胞培养及分子细胞遗传学研究.pdf

The cultivation of fin tissue and the molecular and cytogenetic study loaches Misgurnus anguillicaudatus with different ploidy status By Liu Bo A Master’s Degree of Acquaculture Supervisor: Professor Li Ya Juan 2014.06 该研究由：国家自然科学基金项目）、 辽宁省科学技术基金项目（201102019 ）和大连海 洋大学博士启动基金项目（017208 ）资助 摘要 摘要 为探讨不同倍性泥鳅染色体组构成及建立活体制备染色体标本的方法，本研究以自然 二倍体泥鳅、正反杂交三倍体泥鳅(4n ♀ ×2n ♂、2n ♀ ×4n ♂) 、自然四倍体泥鳅为研 究对象，利用鳍组织培养获得染色体制备的材料，建立了泥鳅鳍组织细胞制备染色体标本 方法， 同时对不同倍性泥鳅鳍组织培养细胞 的染色体的数目、核型做了分析，利用 Ag-NORs 、CMA /DA/DAPI 三重荧光染色技术等对不同北行泥鳅的染色体带型作了进行了 3 系统研究。 1. 不同倍性泥鳅鳍细胞培养及染色体标本制备方法的建立 选择 10%的碘伏溶液杀菌效果良好，对于细胞生长影响较小，尤以 15 min 效果最明显， 细胞迁出迅速；在终止培养前 3 h 加入秋水仙素至终浓度为 1.5 μg/ml ，自然二倍体、杂交 三倍体(4n ♀ × 2n ♂) 、自然四倍体泥鳅鳍细胞中期分裂相染色体众数最高，分别为 93.33%、90%、70% ；25 ℃低渗处理40 min ，可以获得大量图像清晰、长度适中、分散良 好、数目完整的染色体中期分裂相。 2. 不同倍性泥鳅染色体带型研究 （1）Ag-NORs ：自然二倍体泥鳅鳍培养的细胞染色体中期分裂相中 Ag-NORs 数为 2 对，正反杂交三倍体泥鳅(4n ♀ ×2n ♂、2n ♀ ×4n ♂)鳍培养的细胞染色体中期分裂相 中Ag-NORs 数为 3 对，自然四倍体泥鳅鳍培养的细胞染色体中期分裂相中 Ag-NORs 数为 4 对。 （2 ）CMA /DA/DAPI 三重荧光染色：自然二倍体泥鳅鳍培养的细胞染色体中期分裂 3 相中 CMA3 阳性位点为2 对，正反杂交三倍体泥鳅（4n ♀ ×2n ♂、2n ♀ ×4n ♂）鳍培 养的细胞染色体中期分裂相中 CMA3 阳性位点均为 3 对，自然四倍体泥鳅鳍培养的细胞染 色体中期分裂相中 CMA3 阳性位点为4 对。 （4 ）Ag-NORs 、CMA /DA/DAPI 荧光显带在染色体上的位置位于第 1 对中部着丝粒 3 染色体（M1 ）的短臂末端，也就是核仁组织区的位置。 综上所述，利用不同倍性泥鳅鳍培养的细胞可以达到活体制备染色体的目的，能得到 连续的实验结果；对不同倍性泥鳅鳍细胞制备的染色体进行数目、核型和带型分析可以证 实与体细胞基本无差异。因此，该实验建立的方法可以应用泥鳅的细胞遗传和分子遗传学 研究中，提供重要的参考价值。 关键词：泥鳅；鳍组织；细胞培养；染色体；Ag-NORs ；CMA /DA/DAPI 3 I Abstract