最新抗体的选择.ppt

抗 体 的 选 择 其木格 2010.10 主 要 内 容 概 念 1. 抗体（antibody, Ab）功能性概念 是由抗原刺激而产生并能与刺激其产生的抗原发生特异性结合的、具有免疫功能的糖蛋白。抗体主要存在血清中，也存在于如呼吸道粘膜液、小肠粘膜液、唾液以及乳汁等其它体液中。 2. 免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）结构性概念 具有抗体活性或化学结构与抗体分子相似的球蛋白。 抗体的分子结构 轻链：VL、CL 重链：VH CH1、CH2、CH3、CH4 IgG IgM IgA IgE IgD 1.类和亚类（根据H链的抗原性不同） IgG —γ(gamma) IgA — α(alpha) IgM — μ(mu) IgD — δ(delta) IgE — ε(epsilon) 主要功能 1. VL和VH是抗原结合的部位（FV区）。 2. CL和CH上具有同种异型的遗传标记。 3. IgG的CH2和IgM的CH3具有补体固有成分C1q的结合点，参与激活补体系统。 4. CH3/CH4具有结合包括单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、B细胞、NK细胞等细胞的Fc段受体的功能。 5. IgG的CH2+CH3 具有介导IgG通过胎盘的特性。 三、免疫球蛋白的水解片段 1. 木瓜蛋白酶（Papain）（将重链于近氨基端切断） Fab段（fragment of antigen- binding，抗原结合片段） Fab段可以与抗原结合，具有抗体的活性。 Fc段（fragment crystalizable，可结晶片段） Fc段不能与抗原结合，但可执行Ig的其他生物学功能。 2. 胃蛋白酶（Pepsin）（将重链于近羧基端切断） F( ab ′)2 ：可结合2个抗原表位。 pFc ′：无生物学活性。 什么是一抗二抗？ 一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。 第一抗体就是平常所说的抗体，即能和抗原特异性结合。 　 　 第二抗体是能和抗体结合的，即抗体的抗体。主要用于检测抗体的存在。利用抗原-抗体反应原理，就是以一抗作为探针，它与目的蛋白作用并连接，再用带有荧光（或同位素）标记的二抗与一抗作用，最后显色，发光位置就有目的蛋白。 如何选择二抗？ 检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，其中如何根据一抗的种属来源和类型选择二抗尤为重要。 1、一抗的种属来源： 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。 1、一抗的种属来源： 常用的二抗产品包括： 抗小鼠二抗（anti-mouse）、抗兔二抗（anti-rabbit）、 抗山羊二抗（anti-goat）、抗绵羊二抗（anti- sheep）、 抗人二抗（anti-human）、抗豚鼠二抗（anti- guinea pig） 抗大鼠二抗（anti-rat）、抗猪二抗（anti-swine）、 抗马二抗（anti-horse）、抗牛二抗（anti- bovine）、 抗鸡二抗（anti- chicken）、抗鸭二抗（anti- duck）等。 2、一抗的类别亚型： 除了要与一抗的种属来源相一致，二抗还需与一抗的类别或亚类相匹配，这通常是针对单克隆抗体而言。一般来说多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。而单克隆抗体则相对复杂些，由于单克隆抗体有不同的类别和亚型，因此相应的二抗也需要根据这些亚型进行选择。 2、一抗的类别亚型： 单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗