饲喂瘦肉精猪肌microrna的表达差异及靶基因预测.pdf

摘 要 摘 要 microRNAs (miRNAs)是一类长为22nt 左右的非编码RNA 分子，对生物体的生理功能具有 广泛的内源性调节作用。miRNA 功能探索和表达分析在模式生物中迅速地进行，miRNA 的研 究已成为当前生物学领域的热点问题，它们不但在胚胎发育时期表达，在成体中也存在不同的 表达情况。 盐酸克伦特罗作为 β-兴奋剂的一种，在用于改善猪肉品质时有害于人的健康，间接或直接 影响到了一些基因从而很大程度上提高了瘦肉率、降低了脂肪率，因此我们用盐酸克伦特罗处 理的香猪肌肉组织研究几种microRNA 的差异表达并期望与靶基因建立联系。 本实验首先运用northern bolt 方法证明猪骨骼肌中存在miR-1 、miR-133 、miR-206 、miR-29a 、 miR-29b 、miR-181a 、miR-193 、miR-195 、miR-196a 、let-7a、let-7b、miR-26a 、miR-30d 等 13 类microRNAs ，其中miR-1 、miR-133 、miR-206 的杂交条带明显，miR-181a 、miR-193 、miR-195 等杂交条带很微弱；然后利用real-time PCR 方法检测这几种microRNA 在骨骼肌组织中的表达 情况，结果发现： 1 miR-1、miR-133 、miR-206 的表达量远高于其他的microRNAs ，但是在实验组和对照组之 间表达没有差异。 2 let-7a、miR-26a 在实验组和对照组之间表达差异不明显，但是都表现出随个体月龄增长表 达下降的趋势。 3 miR-181a、miR-193 、miR-195 、miR-196a 、miR-30d 、let-7b 的表达不具有明显的规律性。 4 miR-29a 、miR-29b 在实验组和对照组之间表达差异显著，且呈相反的规律，即个体中 miR-29a 、miR-29b 的表达情况恰好相反。 5 根据基因芯片的结果，整理出在盐酸克伦特罗的作用下香猪肌肉组织中表达差异的基因， 在这些基因中预测上述microRNA 可能存在的靶位点： 1）非表达差异的microRNA 可以在这些基因上预测到靶位点； 2 ）表达差异的miR-29a 、miR-29b 的靶位点有Integrin-linked kinase、Elongation factor 1 alpha、 MHC class I antigen 、SWI/SNF complex、HnRNP F protein 等，可以分析microRNA 和靶基因二 者对盐酸克伦特罗处理的肌肉组织表型的影响。 关键词 microRNA ，盐酸克伦特罗，香猪肌肉 I Abstract Identification of different microRNA expression and the target gene prediction in clenbuterol (CLB) feeded Chinese Miniature Swines muscle tissue Abstract microRNA(miRNAs) are 22nt non-coding RNA that have been shown to inner regulate gene expression in variety of physiological function for organism. The expression analysis, as with functional exploration had been carried out in model organisms, therefore