奶山羊乳腺消减库构建及差异表达基因的研究.pdfVIP

摘 要 乳腺为哺乳动物新生儿的生长发育提供营养均衡的乳汁，并且可以为人类生活提供 不可缺少的乳制品。在奶山羊的生理周期中乳腺组织经历发育、泌乳和退化三个循环过 程，与此同时乳腺上皮细胞也历经增殖、分化，凋亡的变化。在奶山羊一个泌乳周期的 不同阶段，产奶量的高低和乳成分的变化存在很大的差异，随着基因组学研究的不断深 入，人们逐渐认识到导致这些差异产生的原因，是由乳腺组织中诸多相关功能基因时空 表达决定的，即在不同泌乳期乳腺组织中的功能基因差异表达的结果。本研究在西农萨 能奶山羊泌乳生理变化规律的基础上，构建不同泌乳期乳腺差异表达基因文库，克隆筛 选到的差异表达基因，进行生物信息学分析和预测，采用实时定量PCR分析其表达模式， 并对可能影响乳成分变化的重要候选基因骨桥蛋白(删)进行初步的探讨。为进一步 研究奶山羊乳腺泌乳的分子机制，以及产奶量和乳成分调控机理提供理论依据。 l、利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建西农萨能奶山羊泌乳初期和盛期乳腺组 的消减效率分别为25和210倍，表明了泌乳初期和盛期乳腺组织中差异表达基因的富集效 率也达N2’倍以上；对E．P和P．E消减文库中部分差异表达基因进行测序，E．P文库测序 分析后得到的差异表达基因按功能可大致分为：乳蛋白形成的相关基因(aS2酪蛋白、B 酪蛋白、1c酪蛋白、a乳白蛋白前体物)，转录复合体相关基因(核糖体蛋白L10、核糖体 3．58、12．13和8．0倍，均为阳性克隆。 2、根据不同物种间相同基因编码区的保守性和同源性序列设计合成引物，采用 编码区序列，并提交Genbank获得登录号；利用在线多个生物信息学分析软件对山羊、 构和功能预测，结果发现五个基因在不同物种间氨基酸序列高度同源，所编码的蛋白质 结构、跨膜螺旋、信号肽和潜在功能位点大致相同。其中PPARGClA是一种转录调控 因子，各物种均预测含有N端的转录激活区、核激素相互作用的LXXLL基序及C端的 基序，该基序与细胞聚集、黏附、增殖及组织重塑等有关，山羊OPN比人和小鼠多cAMP GHITM是一种跨膜蛋白，有8个强跨膜区域，推测该基因可能与乳成分的跨膜转运有 的催化作用密切相关。 泌乳曲线基本一致，推测它们是乳腺泌乳周期性变化的调节因子；OPN在泌乳初期的表 达丰度相对值最高，依次是泌乳后期、末期、盛期、中期和干奶期，其中泌乳初期相对 表达水平约为末期高3．9倍左右，进一步说明，在妊娠后期OPN基因就开始表达，OPN 基因可能在乳成分变化中发挥重要的生理功能；SPARC在泌乳初期的表达丰度相对值最 高，随后一直下降，在干奶期表达量最低；d删在泌乳初期的表达丰度相对值最高， 依次是泌乳后期、盛期、末期和干奶期表达量最低。 殖具有促进作用。 关键词：奶山羊；乳腺；抑制性消减杂交；差异表达基因 Il Abstract milk and nutritiousfor ofnewborn Mammarygland，whichprovide growthdevelopment humanlifeis to of mammals，while indispensableprovidedairyproducts．The cycle has andinvolutionofthethree each m锄maryglanddevelopment，lactation processes，during cell the of andcell epithelial cyclemammary experienceprocess