奶牛乳中igg化规律及其转运影响因素研究.pdf

摘 要 本研究以提高乳中IgG含量为主线，以乳中IgG生成和转运调控机理为研究目的，通过六个 试验系统研究了影响IgG含量及转运的因素、转运受体基因多态性对IgG含量和转运的影响、免 疫刺激后奶牛乳中IgG消长规律及转运变化、免疫刺激后基因表达变化等转运机理。 试验一以单因素方差分析、多元相关分析、通径分析和典型相关分析研究了影响乳中IgG浓 度及转运总量的影响因素。单因素方差分析和多元相关分析方法表明乳中IgG浓度与奶牛胎次(，． (P0．01)，为影响乳中IgG浓度的直接因素，而乳糖、产奶阶段和SCS的通径系数分别为尸，J，硝 综合作用的结果。典型相关分析结果表明，胎次、产奶阶段、乳成分等8项指标与免疫活性蛋白 浓度之间存在4对典型变量，第一对和第二对典型变量分别包含了数据信息的67．3％和24．3％， 20％、Lf60％， 具有统计意义。通径分析、典型分析可以刻画约IgG变异信息的30％、IgA10％、IgM 说明本研究所涉及因素不能充分刻画乳中Ig浓度所有的变异，还有许多未知因素尚未涉及。本研 究首次提出Lf指数(Laotoferrin GIndex)，根据指数大小， Index)和IgG指数(Immunoglobulin 可以预测乳中Lf和IgG浓度的高低。通过筛选，乳中Lf和IgG的含量分别提高了40．7％和19．5％， 筛选效果显著。 及转运的相关研究，结果表明，FCORT基因启动区存在4个SNP，分为6个单倍型，共有11种 单倍型组合，但单倍型组合对牛奶IgG含量和牛奶IgG转运总量的效应均不显著(，，0．05)。在 B2M基因外显子上存在3个SNP位点，分为4个单倍型，共有8种单倍型组合，单倍型组合对 比值没有显著影响。单倍型组合H3H3奶牛个体为双碱基缺失纯合的奶牛个体，其奶牛个体有较 低的乳IgG浓度和较高的血清IgG浓度(尸O．05)，表明双碱基缺失纯合个体的乳腺转运IgG效 率较低。通径分析表明添加B2M单倍型组合因素后，刻画IgG变异信息提高到40％ 为典型的笼格状微粒，形态均一，大小平均为27．Ohm，为二十面体结构。 试验四在ISCOM疫苗制备的基础上，引进奶牛乳腺埋植技术和抗原缓释技术制备抗原缓释 抗体进入乳中。研究表明，乳腺埋植ARD对奶牛生产性能和乳成分没有影响，不会引发奶牛乳 房炎；埋植后奶牛外周血液白细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数量增多，试验组T淋巴细胞 sI指数在15d时显著增高(P0．05)，表明ARD具有细胞免疫刺激作用，使奶牛的细胞免疫得到 106；埋植后 一定提高。奶牛血清中特异性抗体滴定效价均明显升高，ELISA滴定效价平均为2X 9d便可检测到乳清中特异性抗体，其应答规律与3种ARD的释放一致。通过比较血清和乳清中 特异性抗体含量变化，发现在血清效价相同的情况下，奶牛个体对IgG的转运存在差异；ARD 埋植免疫后lid和20d抗体转运出现短暂性上升。 试验五比较了初乳、常乳和免疫乳中特异性—gG效价，结果表明，ARD免疫后乳中ELISA 效价平均为4．1×104，可以达到2-3d初乳的水平。 试验六以泌乳小鼠为模型研究ISCOM免疫刺激后砌硝口B2M基因mRNA表达情况，结果表 明，小鼠乳腺82膨和FCGRz基因随着泌乳天数的上升而下降，B2雌因在0d表达最高，FCGRT 基因在1d表达最高，此后维持在一个稳定水平；免疫荧光结果表明，od的乳腺上皮细胞膜上的FoRn 受体表达量要高于其它时间点。ISCOM的免疫刺激后，小鼠乳腺FcGR卿曰27堪因mRNA表达上 调，免疫后4d的砌硝晒22憾因表达量要高于免疫后8d的表达量。 FoRnlSNPtARD|基因表达 关键词：中国荷斯坦奶牛：IgGt Ⅱ ABSTRACT of This focused0nthe ofi